रनसे ए
राइबोन्यूक्लिज़ ए (आरएनएएसईए) एक एकल-फंसे पॉलीपेप्टाइड है जिसमें लगभग 13.7 केडीए के आणविक भार के साथ 4 डाइसल्फ़ाइड बांड होते हैं।RNase A एक एंडोरिबोन्यूक्लिज़ है जो विशेष रूप से C और U अवशेषों पर एकल-फंसे RNA को क्षीण करता है।विशेष रूप से, दरार न्यूक्लियोटाइड के 5′-राइबोज और आसन्न पाइरीमिडीन न्यूक्लियोटाइड के 3′-राइबोज पर फॉस्फेट समूह द्वारा गठित फॉस्फोडाइस्टर बंधन को पहचानती है, ताकि 2, 3′-चक्रीय फॉस्फेट संबंधित 3 में हाइड्रोलाइज्ड हो जाएं। 'न्यूक्लियोसाइड फॉस्फेट (उदाहरण के लिए pG-pG-pC-pA-pG को RNase A द्वारा pG-pG-pCp और A-PG उत्पन्न करने के लिए विखंडित किया जाता है)।RNase A एकल-फंसे हुए RNA को तोड़ने में सबसे अधिक सक्रिय है।अनुशंसित कार्यशील सांद्रता 1-100μG/mL है, जो विभिन्न प्रतिक्रिया प्रणालियों के साथ संगत है।कम नमक सांद्रता (0-100 मिमी NaCl) का उपयोग सिंगल-स्ट्रैंडेड आरएनए, डबल-स्ट्रैंडेड आरएनए और आरएनए-डीएनए संकरण द्वारा गठित आरएनए श्रृंखलाओं को काटने के लिए किया जा सकता है।हालाँकि, उच्च नमक सांद्रता (≥0.3 M) पर, RNase A केवल विशेष रूप से एकल-फंसे RNA को तोड़ता है।
RNase A का उपयोग आमतौर पर प्लास्मिड डीएनए या जीनोमिक डीएनए की तैयारी के दौरान RNA को हटाने के लिए किया जाता है। तैयारी प्रक्रिया के दौरान DNase सक्रिय है या नहीं, यह आसानी से प्रतिक्रिया को प्रभावित कर सकता है।पानी के स्नान में उबालने की पारंपरिक विधि का उपयोग DNase गतिविधि को निष्क्रिय करने के लिए किया जा सकता है।इस उत्पाद में DNase और प्रोटीज़ नहीं है, और उपयोग से पहले गर्मी उपचार की आवश्यकता नहीं है।इसके अलावा, इस उत्पाद का उपयोग आरएनएएस सुरक्षा विश्लेषण और आरएनए अनुक्रम विश्लेषण जैसे आणविक जीवविज्ञान प्रयोगों में भी किया जा सकता है।
जमा करने की अवस्था
उत्पाद को -25～-15℃ पर संग्रहीत किया जा सकता है, जो 2 वर्षों के लिए वैध है।
निर्देश
यह RNase A भंडारण समाधान तैयार करने की सामान्य विधियों में से एक है।इसे भी तैयार किया जा सकता हैप्रयोगशाला या संदर्भ साहित्य में पारंपरिक तरीकों के अनुसार अन्य तरीके (जैसे10 एमएम ट्रिस-एचसीएल, पीएच 7.5 या ट्रिस-एनएसीएल घोल में सीधे घुलना)
1. 10 मिलीग्राम/एमएल RNase A भंडारण समाधान तैयार करने के लिए 10 मिमी सोडियम एसीटेट (पीएच 5.2) का उपयोग करें
2. 15 मिनट के लिए 100 ℃ पर गर्म करना
3. कमरे के तापमान तक ठंडा करें, 1 एम ट्रिस-एचसीएल (पीएच 7.4) की 1/10 मात्रा जोड़ें, इसके पीएच को 7.4 पर समायोजित करें (के लिए)उदाहरण के लिए, 500 मिलीलीटर 10 ग्राम/एमएल RNase भंडारण समाधान 1M ट्रिस-एचसीएल, PH7.4 जोड़ें)
4. जमे हुए भंडारण के लिए -20℃ पर उप-पैकेज किया गया, जो 2 साल तक स्थिर रह सकता है।
[नोट्स]: तटस्थ परिस्थितियों में RNaseA घोल को उबालने पर, RNase अवक्षेपण बनेगा;इसे कम पीएच पर उबालें, और यदि वर्षा होती है, तो इसे देखा जा सकता है, जो प्रोटीन अशुद्धियों की उपस्थिति के कारण हो सकता है।यदि उबालने के बाद तलछट पाई जाती है, तो उच्च गति सेंट्रीफ्यूजेशन (13000आरपीएम) द्वारा अशुद्धियों को हटाया जा सकता है, और फिर फ्रीजिंग भंडारण के लिए उप-पैक किया जा सकता है।
उत्पाद की जानकारी
| समानार्थी शब्द | राइबोन्यूक्लीज़ I;अग्न्याशय राइबोन्यूक्लिज़;राइबोन्यूक्लीज़ 3'-पाइरिमिडनूलिगोन्यूक्लियोटिडोहाइड्रोलेज़;रनसे ए;एंडोरिबोनुलसीज़ I |
| CAS संख्या। | 9001-99-4 |
| उपस्थिति | सफेद लियोफिलाइज्ड पाउडर |
| आणविक वजन | ~ 13.7kDa (अमीनो एसिड अनुक्रम) |
| पीएच मान | 7.6 (गतिविधि सीमा 6-10) |
| उपयुक्त तापमान | 60℃ (गतिविधि सीमा 15-70℃) |
| सक्रिय करने वाला एजेंट | Na2+.क+ |
| अवरोधक | Rnase अवरोधक |
| निष्क्रिय करने की विधि | गर्म करके निष्क्रिय नहीं किया जा सकता, सेंट्रीफ्यूज कॉलम का उपयोग करने का सुझाव दिया गया है |
| मूल | साँड़ का |
| घुलनशीलता | पानी में घुलनशील (10मिलीग्राम/एमएल) |
| सूखे पर हानि | ≤5.0% |
| एंजाइम गतिविधि | ≥60 कुनित्ज़ इकाइयाँ/मिलीग्राम |
| समविभव बिंदु | 9.6 |
टिप्पणियाँ
अपनी सुरक्षा और स्वास्थ्य के लिए, कृपया ऑपरेशन के लिए लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।
