सुपरस्टार क्यूपीसीआर प्रीमिक्स प्लस-यूएनजी
कैट नं: HCB5071E
सुपरस्टार क्यूपीसीआर प्रीमिक्स प्लस-यूएनजी एक विशेष अभिकर्मक है जिसे जांच-आधारित पहचान का उपयोग करके रीयल टाइम पीसीआर गुणात्मक और मात्रात्मक प्रतिक्रियाओं के लिए डिज़ाइन किया गया है, जिसे विशेष रूप से लियोफिलाइजेशन प्रक्रियाओं के लिए विकसित किया गया है।इसमें एक नया हॉट-स्टार्ट एंजाइम हॉटस्टार्ट टैक प्लस (डीजी) शामिल है, जिसकी टाक एंजाइम गतिविधि को कमरे के तापमान पर सील कर दिया जाता है, जो कम तापमान की स्थिति में प्राइमर गैर-विशिष्ट एनीलिंग या प्राइमर डिमर गठन के कारण होने वाले गैर-विशिष्ट प्रवर्धन को प्रभावी ढंग से रोकता है, जिससे सुधार होता है। प्रवर्धन प्रतिक्रिया की विशिष्टता.यह अभिकर्मक तेजी से हॉट-स्टार्टिंग प्राप्त करने के लिए एक अनुकूलित क्यूपीसीआर विशिष्ट बफर और यूएनजी/डीयूटीपी एंटी-संदूषण प्रणाली का उपयोग करता है, जिससे क्यूपीसीआर प्रतिक्रियाओं की दक्षता और संवेदनशीलता में काफी सुधार होता है।यह परिमाणीकरण क्षेत्रों की एक विस्तृत श्रृंखला में अच्छे मानक वक्र प्राप्त कर सकता है और अवशिष्ट पीसीआर उत्पादों या एयरोसोल संदूषण के कारण होने वाले गलत सकारात्मक प्रवर्धन को प्रभावी ढंग से रोकते हुए सटीक रूप से परिमाणीकरण कर सकता है।यह अभिकर्मक एप्लाइड बायोसिस्टम्स, एपेंडॉर्फ, बायो-रेड और रोश आदि जैसे निर्माताओं के अधिकांश फ्लोरोसेंट मात्रात्मक पीसीआर उपकरणों के साथ संगत है, और लियोफिलाइज्ड रूप में अच्छी स्थिरता प्रदर्शित करता है।
अभिकर्मक रचना
1. 5×हॉटस्टार्टप्रीमिक्स प्लस-यूएनजी (एमजी2+मुफ़्त) (डीजी)
2. 250 एमएम एमजीसीएल2
3. 4×लियोप्रोटेक्टेंट (वैकल्पिक)
जमा करने की अवस्था
-20℃ पर दीर्घकालिक भंडारण;4℃ पर 3 महीने तक भंडारित किया जा सकता है।उपयोग से पहले अच्छी तरह मिलाएं औरबार-बार जमने और पिघलने से बचें।
साइकिलिंग प्रोटोकॉल
| प्रक्रिया | अस्थायी. | समय | चक्र |
| पाचन | 50℃ | 2 मिनट | 1 |
| पोलीमरेज़ सक्रियण | 95℃ | 1~5 मि | 1 |
| विकृतीकरण | 95℃ | 10~20 सेकंड | 40-50 |
| एनीलिंग और विस्तार | 56~64℃ | 20~60 सेकंड | 40-50 |
क्यूपीसीआर लिक्विड रिएक्शन Syतने की तैयारी
|
संघटन |
25µL वॉल्यूम |
50µL वॉल्यूम |
अंतिम एकाग्रता |
| 5×हॉटस्टार्टप्रीमिक्स प्लस-यूएनजी(एम.जी2+मुफ़्त) (डीजी) | 5μL | 10μL | 1× |
| 250एमएम एमजीसीएल2 | 0.45μL | 0.9µL | 4.5 एमएम |
| 4×लियोप्रोटेक्टेंट1 | 6.25μL | 12.5μL | 1× |
| 25×प्राइमर-प्रोब मिक्स2 | 1μL | 2μL | 1× |
| टेम्पलेट डीएनए3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | 25µL तक | 50µL तक | —— |
1. प्राइमर के लिए 0.2μM की अंतिम सांद्रता आमतौर पर अच्छे परिणाम देती है;जब प्रतिक्रिया प्रदर्शन खराब हो, तो आवश्यकतानुसार प्राइमर सांद्रता को 0.2-1μM की सीमा के भीतर समायोजित करें।इष्टतम संयोजनों को खोजने के लिए ढाल प्रयोगों के माध्यम से जांच एकाग्रता को आमतौर पर 0.1-0.3μM की सीमा के भीतर अनुकूलित किया जाता है।
2. विभिन्न प्रकार के टेम्पलेट्स में निहित लक्ष्य जीन की प्रतिलिपि संख्या भिन्न होती है;यदि आवश्यक हो, तो इष्टतम टेम्पलेट जोड़ राशि निर्धारित करने के लिए ग्रेडिएंट कमजोर पड़ने का प्रदर्शन किया जा सकता है।
3. इस प्रणाली को लियोफिलाइज़ किया जा सकता है;जब ग्राहक इस प्रणाली का उपयोग फ्रीजिंग-सुखाने की आवश्यकताओं के बिना करते हैं, तो 4×लियोप्रोटेक्टेंट को चुनिंदा रूप से जोड़ा जा सकता है; यदि तरल अभिकर्मकों के चरण उत्पाद प्रदर्शन सत्यापन के दौरान फ्रीज-सूखे उत्पादों की आवश्यकता होती है, तो इसे लियोफिलाइज्ड सिस्टम घटकों के साथ स्थिरता सुनिश्चित करने के लिए 4×लियोप्रोटेक्टेंट जोड़ना होगा। और प्रभाव.
जब सिस्टम का उपयोग किया जाता हैडी फ्रीज-सुखाने के लिए, तैयार करें प्रणाली as अगले:
| संघटन | 25μL प्रतिक्रिया प्रणाली |
| 5 × हॉटस्टार्ट प्रीमिक्स प्लस-यूएनजी (एमजी2+मुफ़्त) (डीजी) | 5μL |
| 250एमएम एमजीसीएल2 | 0.45μL |
| 4×लियोप्रोटेक्टेंट | 6.25μL |
| 25×प्राइमर-प्रोब मिक्स | 1μL |
| ddH2O | 18~20µL तक |
* यदि फ़्रीज़-सुखाने के लिए अन्य प्रणालियों की आवश्यकता है, तो कृपया अलग से परामर्श लें।
लियोफिलाइजेशन प्रक्रियाss
| प्रक्रिया | अस्थायी. | समय | स्थिति | दबाव |
| पूर्व-ठंड | 4℃ | 30 मिनट | पकड़ना |
1 एटीएम |
| -50℃ | 60 मिनट | शीतलक | ||
| -50℃ | 180 मिनट | पकड़ना | ||
| प्राथमिक सुखाने | -30℃ | 60 मिनट | गरम करना |
परम निर्वात |
| -30℃ | 70 मिनट | पकड़ना | ||
| द्वितीयक सुखाने | 25℃ | 60 मिनट | गरम करना |
परम निर्वात |
| 25℃ | 300 मिनट | पकड़ना |
2. उपरोक्त लियोफिलाइजेशन प्रक्रिया केवल संदर्भ के लिए है।विभिन्न उत्पाद प्रकारों और विभिन्न फ़्रीज़-ड्रायर के अलग-अलग पैरामीटर होते हैं, इसलिए वास्तविक के अनुसार समायोजन किया जा सकता हैउपयोग के दौरान स्थितियाँ.
3. विभिन्न लियोफिलाइजेशन प्रक्रियाएं लियोफिलाइज्ड के विभिन्न बैच आकारों के लिए उपयुक्त हो सकती हैंउत्पाद, इसलिए बड़े पैमाने पर उत्पादन के लिए उपयोग किए जाने पर पर्याप्त परीक्षण सत्यापन किया जाना चाहिए।
लियोफिलिज़ का उपयोग करने के निर्देशडी पाउडर
1. लियोफिलाइज्ड पाउडर को संक्षेप में सेंट्रीफ्यूज करें;
2. लियोफिलाइज्ड पाउडर में न्यूक्लिक एसिड टेम्पलेट जोड़ें और 25µL तक पानी डालें;
3. सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा अच्छी तरह मिलाएं और मशीन पर चलाएं।
गुणवत्ता नियंत्रण:
1. कार्यात्मक परीक्षण: क्यूपीसीआर की संवेदनशीलता, विशिष्टता, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता।
2. कोई बहिर्जात न्यूक्लिअस गतिविधि नहीं, कोई बहिर्जात एंडो/एक्सोन्यूक्लिज़ संदूषण नहीं।
तकनीकी जानकारी:
1. सुपरस्टार क्यूपीसीआर प्रीमिक्स प्लस-यूएनजी एक नए हॉट-स्टार्ट एंजाइम का उपयोग करता है जो 1 ~ 5 मिनट के भीतर तेजी से हॉट-स्टार्टिंग को सक्षम बनाता है;विशेष बफर फॉर्मूलेशन के माध्यम से यह मल्टीप्लेक्स फ्लोरोसेंट मात्रात्मक पीसीआर प्रतिक्रियाओं के लिए उपयुक्त है।
2. इसमें उच्च विशिष्टता है जो प्रतिदीप्ति मात्रात्मक पीसीआर सीमा का पता लगाने की संवेदनशीलता में काफी सुधार करती है, जिससे प्रवर्धन वक्र सामान्य हो जाते हैं, प्रतिदीप्ति मूल्य कम एकाग्रता टेम्पलेट्स पर स्पष्ट सुधार प्राप्त करते हैं, जो उच्च संवेदनशीलता प्रतिदीप्ति मात्रात्मक पीसीआर पहचान अभिकर्मकों के रूप में उपयुक्त है।
3. कम एनीलिंग तापमान या 200bp से अधिक लंबे टुकड़ों वाले प्राइमरों के लिए, 3-चरणीय विधि की अनुशंसा की जाती है।
4. डीयूटीपी की उपयोग दक्षता और यूएनजी एंजाइम के प्रति संवेदनशीलता अलग-अलग लक्ष्य जीनों के लिए भिन्न होती है, इस प्रकार यदि यूएनजी प्रणाली का उपयोग करने से पहचान संवेदनशीलता में कमी आती है, तो प्रतिक्रिया प्रणाली को समायोजित और अनुकूलित किया जाना चाहिए।यदि तकनीकी सहायता की आवश्यकता है तो कृपया हमारी कंपनी से संपर्क करें।
5. प्रवर्धन से पहले और बाद में समर्पित क्षेत्रों और पिपेट का उपयोग करें, ऑपरेशन के दौरान दस्ताने पहनें और उन्हें बार-बार बदलें;पीसीआर उत्पादों द्वारा नमूनों के संदूषण को कम करने के लिए पीसीआर पूरा होने के बाद प्रतिक्रिया ट्यूब को न खोलें।
