2×सेंसि डायरेक्ट प्रीमिक्स-यूएनजी (जांच क्यूपीसीआर)
कैट नं: HCB5151A
सेन्सीडायरेक्ट प्रीमिक्स-यूएनजी (प्रोब क्यूपीसीआर) को डीएनए निष्कर्षण या नमूना तैयार किए बिना नमूनों से सीधे पीसीआर निष्पादित करने के लिए डिज़ाइन किया गया है।इस अभिकर्मक में हॉट-स्टार्ट डीएनए पोलीमरेज़, यूरैसिल डीएनए ग्लाइकोसिलेज (यूएनजी), आरएनेज इनहिबिटर, एमजीसीएल शामिल हैं।2, मात्रात्मक पीसीआर (क्यूपीसीआर) के लिए डीएनटीपी (डीटीटीपी के बजाय डीयूटीपी के साथ), और स्टेबलाइजर्स।यह अभिकर्मक उच्च अवरोधक-सहिष्णुता का निर्माण करता है, और इस प्रकार इसे सीधे डीएनए निष्कर्षण के बिना गले की सूजन, लार, एंटी-कोग्युलेटेड पूरे रक्त, प्लाज्मा और सीरम जैसे नमूनों का पता लगाने के लिए लागू किया जा सकता है।अभिकर्मक एंटी-इनहिबिटरी डीएनए पोलीमरेज़ और यूएनजी एंजाइम के मिश्रित एंजाइमों के साथ क्यूपीसीआर के लिए मालिकाना बफर का उपयोग करता है।इसलिए, यह अवरोधक युक्त नमूनों में लक्ष्य जीन का अच्छा प्रवर्धन प्राप्त कर सकता है और पीसीआर अवशिष्ट और एयरोसोल प्रदूषण के कारण होने वाले गलत सकारात्मक प्रवर्धन को रोक सकता है।यह अभिकर्मक अधिकांश फ्लोरोसेंट मात्रात्मक पीसीआर उपकरणों, जैसे एप्लाइड बायोसिस्टम्स, एपेंडॉर्फ, बायो-रेड, रोश इत्यादि के साथ संगत है।
अवयव
1. 50×सेंसिडायरेक्ट एंजाइम/यूएनजी मिक्स
2. 2×सेंसिडायरेक्ट प्रीमिक्स बफर (dUTP)
जमा करने की अवस्था
सभी घटकों को दीर्घकालिक भंडारण के लिए -20℃ और 3 महीने तक के लिए 4℃ पर रखा जाना चाहिए।कृपया पिघलने के बाद अच्छी तरह मिलाएं और उपयोग करने से पहले सेंट्रीफ्यूज करें।बार-बार जमने-पिघलने से बचें।
साइकिलिंग प्रोटोकॉल
कदम | तापमान | समय | चक्र |
पाचन | 50℃ | 2 मिनट | 1 |
पोलीमरेज़ सक्रियण | 95℃ | 1-5 मिनट | 1 |
विकृतीकरण | 95℃ | 10-20s | 40-50 |
एनीलिंग/विस्तार | 56-64℃ | 20-60 के दशक |
पिपेटिंग निर्देश
अभिकर्मक | मात्रा प्रति प्रतिक्रिया | प्रति प्रतिक्रिया मात्रा | अंतिम एकाग्रता |
2×सेंसिडायरेक्ट प्रीमिक्स बफर (dUTP) | 12.5μL | 25μL | 1× |
50×सेंसिडायरेक्ट एंजाइम/यूएनजी मिक्स | 0.5μL | 1μL | 1× |
25×प्राइमर-प्रोब मिक्स1, 2 | 1μL | 2μL | 1× |
नमूना3, 4 | - | - | - |
डीडीएच2O | - | - | - |
कुल मात्रा | 25 μL | 50 μL | - |
1. प्राइमर की अंतिम सांद्रता आमतौर पर 0.2μM होती है।बेहतर परिणामों के लिए, प्राइमर सांद्रता को 0.2-1μM की सीमा के भीतर अनुकूलित किया जा सकता है।
2. आम तौर पर, जांच एकाग्रता को 0.1-0.3μM की सीमा के भीतर अनुकूलित किया जा सकता है।जांच की इष्टतम सांद्रता वास्तविक समय पीसीआर प्रवर्धन उपकरण, जांच के प्रकार और फ्लोरोसेंट लेबलिंग पदार्थ के प्रकार से संबंधित है।कृपया उपकरण मैनुअल या प्रत्येक फ्लोरोसेंट जांच की विशिष्ट आवश्यकताओं को देखें।
3. विभिन्न प्रकार के नमूनों में अवरोधक के विभिन्न प्रकार और सामग्री और लक्ष्य जीन की प्रतिलिपि संख्या होती है।नमूना मात्रा को वास्तविक स्थिति के अनुसार माना जाना चाहिए।यदि आवश्यक हो, तो न्यूक्लीज-मुक्त पानी या टीई बफर मिलाकर नमूने को पतला करें।
4. विभिन्न नमूनों की अनुशंसित मात्रा:
नमूना | एक 50 के लिए वॉल्यूम μL प्रतिक्रिया | अधिकतम अनुपात |
संपूर्ण रक्त का थक्कारोधन | 2.5 μL | 5% |
प्लाज्मा | 15 μL | 30% |
सीरम | 10 μL | 20% |
कंठ फाहा | 10 μL | 20% |
लार | 10 μL | 20% |
गुणवत्ता नियंत्रण
1. फ़ंक्शन का पता लगाना: क्यूपीसीआर की संवेदनशीलता, विशिष्टता और दोहराव।
2. कोई बहिर्जात न्यूक्लिअस गतिविधि नहीं: कोई बहिर्जात एंडोन्यूक्लिज़ और एक्सोन्यूक्लिज़ प्रदूषण नहीं।
उत्पाद के नोट्स
1. यह उत्पाद एक नए प्रकार के हॉट-स्टार्ट डीएनए पोलीमरेज़ का उपयोग करता है, जिसे 1-5 मिनट में सक्रिय किया जा सकता है। चूंकि इसकी प्रतिक्रिया बफर को अनुकूलित किया गया है, यह जांच विधि का उपयोग करके डबल या एकाधिक प्रतिदीप्ति मात्रात्मक पीसीआर के लिए अधिक उपयुक्त है।
2. यदि पीसीआर प्रवर्धन का आरएन मान बहुत कम है या प्रवर्धन स्पष्ट रूप से बाधित है, तो नमूना मात्रा में कमी, प्रतिक्रिया मात्रा में वृद्धि या नमूने के पिछले कमजोर पड़ने से परिणामों में सुधार हो सकता है।
3. रक्त, लार, मूत्र, गले की सूजन आदि का संग्रह नैदानिक मानदंड आवश्यकताओं का पालन करना चाहिए, और न्यूक्लिक एसिड गिरावट को रोकने के लिए ताजा नमूने का उपयोग किया जा सकता है।
4. चूंकि अलग-अलग एम्पलीकॉन्स में डीयूटीपी के लिए अलग-अलग उपयोग दक्षता और यूएनजी के प्रति संवेदनशीलता होती है, इसलिए यदि यूएनजी प्रणाली का उपयोग करते समय पहचान संवेदनशीलता कम हो जाती है, तो अभिकर्मकों को अनुकूलित किया जाना चाहिए।यदि आवश्यक हो तो तकनीकी सहायता के लिए कृपया हमसे संपर्क करें।
5. एक-चरणीय प्रतिक्रियाओं के बीच कैरीओवर पीसीआर उत्पादों के प्रवर्धन से बचने के लिए, प्रवर्धन के लिए समर्पित प्रयोगात्मक क्षेत्र और पिपेट की आवश्यकता होती है।दस्ताने पहनकर काम करें और बार-बार बदलें और पीसीआर प्रवर्धन के बाद प्रतिक्रिया ट्यूब न खोलें।