यूरेसिल डीएनए ग्लाइकोसिलेज़
यूरेसिल-डीएनए ग्लाइकोसिलेज (यूएनजी या यूडीजी) 25 केडीए के आणविक भार के साथ ई.कोली का एक पुनः संयोजक क्लोन है।यह यूरैसिल युक्त सिंगल-स्ट्रैंडेड और डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए से मुक्त यूरैसिल की रिहाई को उत्प्रेरित करता है, और आरएनए के खिलाफ निष्क्रिय है, और इसका उपयोग पीसीआर प्रवर्धन उत्पादों के संदूषण को रोकने के लिए किया जा सकता है।कार्रवाई का सिद्धांत इस तथ्य पर आधारित है कि यदि पीसीआर प्रतिक्रिया में डीटीटीपी के लिए डीयूटीपी को प्रतिस्थापित किया जाता है और डीयू बेस युक्त एक पीसीआर प्रवर्धन उत्पाद बनता है, तो एंजाइम एकल-स्ट्रैंडेड और डबल-स्ट्रैंडेड में यू बेस के ग्लाइकोसिडिक बंधन को चुनिंदा रूप से तोड़ सकता है। डीएनए और पीसीआर प्रवर्धन उत्पाद को नीचा दिखाना।
अनुशंसित आवेदन
संदूषण निवारण प्रवर्धन
गोदाम की स्थिति
दीर्घकालिक भंडारण के लिए -20°C, उपयोग से पहले अच्छी तरह मिलाया जाना चाहिए, बार-बार जमने-पिघलने से बचें।
भंडारण बफ़र
20 एमएम ट्रिस-एचसीएल (पीएच 8.0), 150 एमएम नैसीएल, 1 एमएम ईडीटीए, 1 एमएम डीटीटी, स्टेबलाइजर, 50% ग्लिसरॉल।
इकाई परिभाषा
37°C पर 1 घंटे में dU बेस युक्त 1µg एकल-फंसे डीएनए को विघटित करने के लिए आवश्यक एंजाइम की मात्रा 1 इकाई है।
गुणवत्ता नियंत्रण
1.एसडीएस-पेज इलेक्ट्रोफोरेटिक शुद्धता 98% से अधिक
2.प्रवर्धन संवेदनशीलता, बैच-टू-बैच नियंत्रण, स्थिरता
3.यूएनजी के 1यू को 2 मिनट के लिए 50℃ पर उपचारित करने के बाद, 103 प्रतियों से नीचे यू वाले टेम्पलेट को पूरी तरह से नष्ट कर दिया जाना चाहिए और कोई प्रवर्धन उत्पाद तैयार नहीं किया जा सकता है।
4.कोई बहिर्जात न्यूक्लियस गतिविधि नहीं
निर्देश
| अवयव | आयतन (μL) | अंतिम एकाग्रता |
| 10 × पीसीआर बफर (डीएनटीपी मुक्त, एमजी²+मुक्त) | 5 | 1× |
| डीयूटीपी (डीसीटीपी, डीजीटीपी, डीएटीपी) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP की जगह) | - | 200-600 μM |
| 25 एमएम एमजीसीएल2 | 2-8 μL | 1-4 मिमी |
| 5 यू/μL टैक | 0.25 | 1.25 यू |
| 5 यू/μL यूएनजी | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 यू (0.1-0.5) |
| 25 × प्राइमर मिक्सए | 2 | 1× |
| खाका | - | ＜1μg/प्रतिक्रिया |
| ddH₂O | 50 तक | - |
टिप्पणी: ए: यदि क्यूपीसीआर/क्यूआरटी-पीसीआर के लिए उपयोग किया जाता है, तो फ्लोरोसेंट जांच को प्रतिक्रिया प्रणाली में जोड़ा जाना चाहिए।आमतौर पर, 0.2 μM की अंतिम प्राइमर सांद्रता अच्छे परिणाम दे सकती है;जब प्रतिक्रिया प्रदर्शन खराब होता है, तो प्राइमर एकाग्रता को 0.2-1 μM की सीमा में समायोजित किया जा सकता है।आमतौर पर, जांच एकाग्रता को 0.1-0.3 μM की सीमा में अनुकूलित किया जाता है।प्राइमर और जांच का सर्वोत्तम संयोजन खोजने के लिए एकाग्रता ढाल प्रयोग किए जा सकते हैं।
टिप्पणियाँ
1.यूएनजी एंजाइम का उपयोग पीसीआर प्रवर्धन प्रतिक्रिया से पहले प्रतिक्रिया प्रणाली से दूषित डीयूटीपी प्रवर्धन उत्पादों को हटाने के लिए किया जा सकता है, फिर उत्पाद संदूषण के कारण गलत-सकारात्मक परिणामों से बचने के लिए।
2.संदूषण-रोधी पीसीआर प्रतिक्रिया में उपयोग किए जाने वाले यूएनजी एंजाइम के लिए इष्टतम तापमान आमतौर पर 2 मिनट के लिए 50 ℃ है;निष्क्रियता की स्थिति 5 मिनट के लिए 95℃ है।
3.बार-बार जमने-पिघलने से बचें और तापमान में बड़े उतार-चढ़ाव का सामना न करें।
4.प्रवर्धित किए जाने वाले विभिन्न जीनों में dUTP की उपयोगिता दक्षता और UNG एंजाइम के प्रति संवेदनशीलता अलग-अलग होती है, इसलिए, यदि UNG प्रणाली के उपयोग से पहचान संवेदनशीलता में कमी आती है, तो प्रतिक्रिया प्रणाली को समायोजित और अनुकूलित किया जाना चाहिए, यदि आपको तकनीकी सहायता की आवश्यकता है, तो कृपया संपर्क करें हमारी कंपनी।
