प्रोटीनेज के एनजीएस (पाउडर)
कैट नं: HC4507A
एनजीएस प्रोटीज़ के उच्च एंजाइम गतिविधि और विस्तृत सब्सट्रेट विशिष्टता के साथ एक स्थिर सेरीन प्रोटीज़ है। एंजाइम हाइड्रोफोबिक अमीनो एसिड, सल्फर युक्त अमीनो एसिड और सुगंधित अमीनो एसिड के सी-टर्मिनल से सटे एस्टर बॉन्ड और पेप्टाइड बॉन्ड को प्राथमिकता से विघटित करता है।इसलिए, इसका उपयोग अक्सर प्रोटीन को छोटे पेप्टाइड्स में विघटित करने के लिए किया जाता है।एनजीएस प्रोटीज़ K, Asp के साथ एक विशिष्ट सेरीन प्रोटीज़ है39-उसका69-सेर224उत्प्रेरक त्रय जो सेरीन प्रोटीज के लिए अद्वितीय है, और उत्प्रेरक केंद्र टो सीए से घिरा हुआ है2+स्थिरीकरण के लिए साइटों को बांधना, व्यापक परिस्थितियों में उच्च एंजाइम गतिविधि को बनाए रखना।
विनिर्देश
| उपस्थिति | सफ़ेद से मटमैला अनाकार पाउडर, लियोफ़िलाइज़्ड |
| निश्चित गतिविधि | ≥40U/मिलीग्राम ठोस |
| DNase | किसी का पता नहीं चला |
| RNase | किसी का पता नहीं चला |
| जैव बोझ | ≤50CFU/g ठोस |
| न्यूक्लिक एसिड अवशेष | <5पीजी/मिलीग्राम ठोस |
गुण
| स्रोत | ट्रिटिराचियम एल्बम |
| ईसी नंबर | 3.4.21.64(ट्रिटिराचियम एल्बम से पुनः संयोजक) |
| आणविक वजन | 29kDa (एसडीएस-पेज) |
| समविभव बिंदु | 7.81 चित्र.1 |
| इष्टतम पीएच | 7.0-12.0 (सभी उच्च गतिविधि करते हैं) चित्र 2 |
| इष्टतम तापमान | 65℃ चित्र 3 |
| पीएच स्थिरता | पीएच 4.5-12.5 (25℃,16 घंटे) चित्र 4 |
| तापीय स्थिरता | 50℃ से नीचे (पीएच 8.0, 30 मिनट) चित्र 5 |
| संग्रहण का स्थायित्व | 12 महीने तक 25℃ पर संग्रहित चित्र.6 |
| सक्रियकर्ता | एसडीएस, यूरिया |
| इनहिबिटर्स | डायसोप्रोपाइल फ्लोरोफॉस्फेट;बेंज़िलसल्फोनील फ्लोराइड |
जमा करने की अवस्था
लियोफिलाइज्ड पाउडर को लंबे समय तक प्रकाश से दूर -25~-15 ℃ पर स्टोर करें;विघटन के बाद, प्रकाश से 2-8℃ दूर अल्पकालिक भंडारण के लिए उचित मात्रा में या प्रकाश से -25~-15℃ दूर दीर्घकालिक भंडारण के लिए विभाज्य।
सावधानियां
उपयोग या वजन करते समय सुरक्षात्मक दस्ताने और चश्मा पहनें, और उपयोग के बाद अच्छी तरह हवादार रखें।इस उत्पाद से त्वचा में एलर्जी और आंखों में गंभीर जलन हो सकती है।यदि यह साँस के साथ अंदर चला जाता है, तो इससे एलर्जी या अस्थमा के लक्षण या सांस की तकलीफ हो सकती है।श्वसन संबंधी जलन हो सकती है.
इकाई परिभाषा
एनजीएस प्रोटीज़ K की एक इकाई को मानक निर्धारण स्थितियों के तहत कैसिइन को 1 μmol L-टायरोसिन में हाइड्रोलाइज़ करने के लिए आवश्यक एंजाइम की मात्रा के रूप में परिभाषित किया गया है।
अभिकर्मकों की तैयारी
| अभिकर्मक | उत्पादक | सूची |
| कैसिइन तकनीकीगाय के दूध से | सिग्मा एल्ड्रिच | सी7078 |
| NaOH | सिनोफार्म केमिकलअभिकर्मक कंपनी लिमिटेड | 10019762 |
| नः2PO4·2एच2O | सिनोफार्म केमिकलअभिकर्मक कंपनी लिमिटेड | 20040718 |
| Na2HPO4 | सिनोफार्म केमिकलअभिकर्मक कंपनी लिमिटेड | 20040618 |
| ट्राइक्लोरोएसिटिक एसिड | सिनोफार्म केमिकलअभिकर्मक कंपनी लिमिटेड | 80132618 |
| नाजिया | सिनोफार्म केमिकलअभिकर्मक कंपनी लिमिटेड | 10018818 |
| एसीटिक अम्ल | सिनोफार्म केमिकलअभिकर्मक कंपनी लिमिटेड | 10000218 |
| एचसीएल | सिनोफार्म केमिकलअभिकर्मक कंपनी लिमिटेड | 10011018 |
| सोडियम कार्बोनेट | सिनोफार्म केमिकलअभिकर्मक कंपनी लिमिटेड | 10019260 |
| फोलिन-फिनोल | सांगोन बायोटेक (शंघाई)कंपनी लिमिटेड, | ए500467-0100 |
| एल tyrosine | सिग्मा | 93829 |
अभिकर्मक I:
सब्सट्रेट: गोजातीय दूध के घोल से 1% कैसिइन: 1 ग्राम गोजातीय दूध केसिन को 50 मिलीलीटर 0.1M सोडियम फॉस्फेट घोल, पीएच 8.0 में घोलें, 15 मिनट के लिए 65-70 डिग्री सेल्सियस पर पानी के स्नान में गर्म करें, हिलाएं और घोलें, पानी से ठंडा करें, समायोजित करें। सोडियम हाइड्रॉक्साइड को pH 8.0 तक और 100 मि.ली. तक पतला करें।
अभिकर्मक II:
टीसीए समाधान: 0.1M ट्राइक्लोरोएसिटिक एसिड, 0.2M सोडियम एसीटेट और 0.3M एसिटिक एसिड (क्रमशः 1.64g ट्राइक्लोरोएसिटिक एसिड + 1.64g सोडियम एसीटेट + 1.724mL एसिटिक एसिड का वजन करें, 50mL विआयनीकृत पानी डालें, HCl के साथ pH 4.03 पर समायोजित करें, और पतला करें) 100 मि.ली.)।
अभिकर्मक III:
0.4m सोडियम कार्बोनेट घोल (4.24g निर्जल सोडियम कार्बोनेट का वजन करें और 100mL पानी में घोलें)
अभिकर्मक चतुर्थ:
फोलिन फिनोल अभिकर्मक: विआयनीकृत पानी के साथ 5 बार पतला करें।
अभिकर्मक वी:
एंजाइम मंदक: 0.1 एम सोडियम फॉस्फेट समाधान, पीएच 8.0।
अभिकर्मक VI:
एल-टायरोसिन मानक समाधान: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 यूमोल/एमएल एल-टायरोसिन 0.2 एम एचसीएल के साथ भंग।
प्रक्रिया
1. यूवी-विज़ स्पेक्ट्रोफोटोमीटर चालू करें और फोटोमेट्रिक माप का चयन करें।
2. तरंग दैर्ध्य को 660nm पर सेट करें।
3. जल स्नान चालू करें, तापमान को 37℃ पर सेट करें, सुनिश्चित करें कि तापमान 3-5 मिनट तक अपरिवर्तित रहे।
4. 0.5mL सब्सट्रेट को 2mL सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में 37℃ पानी के स्नान में 10 मिनट के लिए पहले से गरम करें।
5. 0.5mL पतला एंजाइम घोल 10 मिनट के लिए पहले से गरम सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में निकालें।एंजाइम मंदक को रिक्त समूह के रूप में सेट करें।
6. प्रतिक्रिया के तुरंत बाद 1.0 एमएल टीसीए अभिकर्मक जोड़ें।अच्छी तरह मिलाएं और 30 मिनट के लिए पानी के स्नान में रखें।
7. अपकेंद्रित्र प्रतिक्रिया समाधान।
8. निम्नलिखित घटकों को निर्दिष्ट क्रम में जोड़ें।
| अभिकर्मक | आयतन |
| सतह पर तैरनेवाला | 0.5 एमएल |
| 0.4एम सोडियम कार्बोनेट | 2.5 एमएल |
| फोलिन फिनोल अभिकर्मक | 0.5 एमएल |
9. 30 मिनट के लिए 37℃ के तापमान वाले पानी के स्नान में इनक्यूबेट करने से पहले अच्छी तरह मिलाएं।
10. आयुध डिपो660OD के रूप में निर्धारित किया गया था1;रिक्त नियंत्रण समूह: ओडी निर्धारित करने के लिए एंजाइम समाधान को प्रतिस्थापित करने के लिए एंजाइम मंदक का उपयोग किया जाता है660ओडी के रूप में2, ΔOD=OD1-ओडी2.
11. एल-टायरोसिन मानक वक्र: 0.5 एमएल विभिन्न सांद्रता एल-टायरोसिन समाधान, 2.5 एमएल 0.4 एम सोडियम कार्बोनेट, 5 एमएल सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में 0.5 एमएल फोलिन फिनोल अभिकर्मक, 30 मिनट के लिए 37 ℃ में सेते हैं, ओडी के लिए पता लगाते हैं660एल-टायरोसिन की विभिन्न सांद्रता के लिए, फिर मानक वक्र Y=kX+b प्राप्त किया, जहां Y एल-टायरोसिन एकाग्रता है, X OD है600.
गणना
2: प्रतिक्रिया समाधान की कुल मात्रा (एमएल)
0.5: एंजाइम समाधान की मात्रा (एमएल)
0.5: क्रोमोजेनिक निर्धारण (एमएल) में प्रयुक्त प्रतिक्रिया तरल मात्रा
10: प्रतिक्रिया समय (न्यूनतम)
Df: तनुकरण एकाधिक
C: एंजाइम सांद्रता (मिलीग्राम/एमएल)
आंकड़ों
चित्र.1 डीएनए अवशेष
| नमूना | एवेन्यू C4 | न्यूक्लिक अम्ल रिकवरी(पीजी/मिलीग्राम) | वसूली(%) | कुल न्यूक्लिक अम्ल ( पीजी/मिलीग्राम) |
| पीआर के | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| पीआरके+एसटीडी2 | 18.723 | 126.728 | — | — |
| एसटीडी1 | 12.955 |
— |
— |
— |
| एसटीडी2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| एसटीडी4 | 23.135 | |||
| एसटीडी5 | 26.625 | |||
| आरएनए मुक्त H2O | अनपेक्षित | — | — | — |
चित्र.2 इष्टतम पीएच
चित्र.3 इष्टतम तापमान
चित्र.4 पीएच स्थिरता
चित्र.5 तापीय स्थिरता
चित्र.6 25℃ पर भंडारण स्थिरता
