Rnase अवरोधक (ग्लिसरॉल मुक्त)
म्यूरिन आरएनएज़ अवरोधक एक पुनः संयोजक म्यूरिन आरएनएज़ अवरोधक है जिसे ई.कोली से व्यक्त और शुद्ध किया जाता है।यह गैर-सहसंयोजक बंधन के माध्यम से 1:1 के अनुपात में RNase A, B या C से जुड़ता है, जिससे तीन एंजाइमों की गतिविधि बाधित होती है और RNA को क्षरण से बचाया जाता है।हालाँकि, यह एस्परगिलस के RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H या RNase के विरुद्ध प्रभावी नहीं है।म्यूरिन आरएनएएस अवरोधक का परीक्षण आरटी-पीसीआर, आरटी-क्यूपीसीआर और आईवीटी एमआरएनए द्वारा किया गया था, और यह विभिन्न वाणिज्यिक रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस, डीएनए पोलीमरेज़ और आरएनए पोलीमरेज़ के साथ संगत था।
मानव RNase अवरोधकों की तुलना में, म्यूरिन RNase अवरोधक में दो सिस्टीन नहीं होते हैं जो ऑक्सीकरण के प्रति अत्यधिक संवेदनशील होते हैं जो अवरोधक को निष्क्रिय करने का कारण बनते हैं।यह इसे डीटीटी की कम सांद्रता (1 एमएम से कम) पर स्थिर बनाता है।यह सुविधा इसे उन प्रतिक्रियाओं में उपयोग के लिए उपयुक्त बनाती है जहां डीटीटी की उच्च सांद्रता प्रतिक्रिया के प्रतिकूल होती है (जैसे वास्तविक समय आरटी-पीसीआर)।
Aआवेदन
इस उत्पाद का व्यापक रूप से किसी भी प्रयोग में उपयोग किया जा सकता है जहां आरएनए क्षरण से बचने के लिए आरएनएएस हस्तक्षेप संभव है, जैसे:
1.प्रथम-स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण, आरटी-पीसीआर, आरटी-क्यूपीसीआर, आदि;
2.इन-विट्रो प्रतिलेखन/अनुवाद (उदाहरण के लिए इन-विट्रो में वायरल प्रतिकृति) में गिरावट से आरएनए को सुरक्षित रखें;
3. आरएनए अलगाव और शुद्धिकरण के दौरान RNase गतिविधि का निषेध।
जमा करने की अवस्था
-25～-15℃ पर स्टोर करें;
फ़्रीज़-पिघलना चक्र ≤ 5 बार;
1 वर्ष के लिए वैध.
इकाई परिभाषा
एक इकाई को RNase A के 5 एनजी की गतिविधि को 50% तक बाधित करने के लिए आवश्यक RNase अवरोधक की मात्रा के रूप में परिभाषित किया गया है।
आणविक वजन
RNase अवरोधक (ग्लिसरॉल-मुक्त) एक 50 kDa प्रोटीन है।
गुणवत्ता नियंत्रण
एक्सोन्यूक्लिज़ गतिविधि:
37 डिग्री सेल्सियस पर 16 घंटे के लिए 1 μg λ-Hind III डाइजेस्ट डीएनए के साथ 40 यू एंजाइम के ऊष्मायन के परिणामस्वरूप जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा निर्धारित डीएनए का कोई पता लगाने योग्य क्षरण नहीं हुआ।
एंडोन्यूक्लिज़ गतिविधि:
37 डिग्री सेल्सियस पर 16 घंटे तक 1 μg λ डीएनए के साथ 40 यू एंजाइम के ऊष्मायन के परिणामस्वरूप जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा निर्धारित डीएनए का कोई पता लगाने योग्य क्षरण नहीं हुआ।
निकिंग गतिविधि:
37℃ पर 16 घंटे के लिए 1 μg pBR322 के साथ 40 यू एंजाइम के ऊष्मायन के परिणामस्वरूप जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा निर्धारित डीएनए का कोई पता लगाने योग्य क्षरण नहीं हुआ।
RNase गतिविधि:
37℃ पर 4 घंटे के लिए 1.6 μg MS2 RNA के साथ 40 यू एंजाइम के ऊष्मायन के परिणामस्वरूप जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा निर्धारित आरएनए का कोई पता लगाने योग्य क्षरण नहीं हुआ।
E.कोलाई डीएनए:
टैक्मैन क्यूपीसीआर द्वारा 40 यू एंजाइम का पता लगाया जाता है।ई.कोली डीएनए ≤ 0. 1pg/40U है।
Notes
1.एंजाइम निष्क्रियता को रोकने के लिए जोर से हिलाएं या हिलाएं नहीं।
2.RNase अवरोधक 25℃ से 55℃ तक के तापमान पर सक्रिय होता है और ≥65℃ पर निष्क्रिय हो जाता है।
3.RNase H, RNase 1, और RNase T1 की गतिविधि बाधित नहीं है।
4. RNase गतिविधि को रोकने के लिए pH रेंज व्यापक है (PH 5-9 पर सक्रिय), pH 7-8 पर अधिकतम गतिविधि प्रदर्शित करती है।
