तापमान संवेदनशील यूएनजी
तापमान संवेदनशील यूएनजी (टीएस-यूएनजी) ई. कोलाई में पुनः संयोजक अभिव्यक्ति द्वारा प्राप्त किया जाता है।एंजाइम यूरैसिल युक्त सिंगल और डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए से मुक्त यूरैसिल की रिहाई को उत्प्रेरित करता है और आरएनए के खिलाफ निष्क्रिय होता है।ई. कोली जीन मूल के पारंपरिक यूएनजी एंजाइम की तुलना में, टीएस-यूएनजी एंजाइम की कम तापमान (20℃~37℃) पर उच्च गतिविधि होती है और यह तापमान के प्रति संवेदनशील होता है और आसानी से निष्क्रिय (50℃) होता है, जो डीयूटीपी-युक्त प्रवर्धन के क्षरण से बचाता है। पारंपरिक यूएनजी एंजाइम के निष्क्रिय होने के बाद बची हुई अवशिष्ट गतिविधि द्वारा उत्पादों को कमरे के तापमान पर रखा जा सकता है।इसलिए, टीएस-यूएनजी एंजाइम न केवल पीसीआर संदूषण रोकथाम प्रतिक्रिया के लिए उपयुक्त है, बल्कि आरटी-पीसीआर प्रवर्धन कार्यक्रम के साथ भी अच्छी तरह से मेल खाता है और आरटी-पीसीआर संदूषण रोकथाम प्रतिक्रिया में इसका उपयोग किया जा सकता है।
अनुशंसित आवेदन
संदूषण निवारण प्रवर्धन
गोदाम की स्थिति
दीर्घकालिक भंडारण के लिए -20°C, उपयोग से पहले अच्छी तरह मिलाया जाना चाहिए, बार-बार जमने-पिघलने से बचें।
भंडारण बफ़र
20 एमएम ट्रिस-एचसीएल (पीएच 7.5), 100 एमएम नैसीएल, 0.1 एमएम ईडीटीए, 1 एमएम डीटीटी, स्टेबलाइजर, 50% ग्लिसरॉल।
इकाई परिभाषा
37°C पर 1 घंटे में dU बेस युक्त 1µg एकल-फंसे डीएनए को विघटित करने के लिए आवश्यक एंजाइम की मात्रा गतिविधि की 1 इकाई (U) है।
गुणवत्ता नियंत्रण
1.एसडीएस-पेज इलेक्ट्रोफोरेटिक शुद्धता 98% से अधिक
2.गिरावट गतिविधि, बैच-टू-बैच नियंत्रण, स्थिरता
3.कोई बहिर्जात न्यूक्लिअस गतिविधि नहीं, कोई बहिर्जात एंडोन्यूक्लिज़ या एक्सोन्यूक्लिज़ संदूषण नहीं।
निर्देश
| अवयव | आयतन (μL) | अंतिम एकाग्रता |
| 10 × पीसीआर बफर (डीएनटीपी मुक्त, एमजी²+मुक्त) | 5 | 1× |
| डीयूटीपी (डीसीटीपी, डीजीटीपी, डीएटीपी) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP की जगह) | - | 200-600 μM |
| 25 एमएम एमजीसीएल2 | 2-8 μL | 1-4 मिमी |
| 5 यू/μL टैक | 0.25 | 1.25 यू |
| 1 यू/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 यू (0.1-0.5यू) |
| 25 × प्राइमर मिक्सए | 2 | 1× |
| खाका | - | ＜1μg/प्रतिक्रिया |
| ddH₂O | 50 तक | - |
नोट: ए: यदि क्यूपीसीआर/क्यूआरटी-पीसीआर के लिए उपयोग किया जाता है, तो फ्लोरोसेंट जांच को प्रतिक्रिया प्रणाली में जोड़ा जाना चाहिए।आमतौर पर, 0.2 μM की अंतिम प्राइमर सांद्रता अच्छे परिणाम दे सकती है;जब प्रतिक्रिया प्रदर्शन खराब होता है, तो प्राइमर एकाग्रता को 0.2-1 μM की सीमा में समायोजित किया जा सकता है।आमतौर पर, जांच एकाग्रता को 0.1-0.3 μM की सीमा में अनुकूलित किया जाता है।प्राइमर और जांच का सर्वोत्तम संयोजन खोजने के लिए एकाग्रता ढाल प्रयोग किए जा सकते हैं।
टिप्पणियाँ
1.टीएस-यूएनजी एंजाइम का इष्टतम प्रतिक्रिया तापमान अपेक्षाकृत कम है, और इसे 20 ℃ ~ 37 ℃ की सीमा में अनुकूलित किया जा सकता है, एंजाइम की खुराक और प्रतिक्रिया समय 0.1 ~ 0.5 यू, 5 ~ की सीमा में अनुकूलित किया जा सकता है दस मिनट;और रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन की प्रक्रिया में एंजाइम को निष्क्रिय किया जा सकता है।
2.यह संदूषण को रोकने के लिए पीसीआर और आरटी-पीसीआर के लिए उपयुक्त है।
3.बार-बार जमने-पिघलने से बचें और तापमान में बड़े उतार-चढ़ाव का सामना न करें।
4.प्रवर्धित किए जाने वाले विभिन्न जीनों में dUTP की उपयोगिता दक्षता और UNG एंजाइम के प्रति संवेदनशीलता अलग-अलग होती है, इसलिए, यदि UNG प्रणाली के उपयोग से पहचान संवेदनशीलता में कमी आती है, तो प्रतिक्रिया प्रणाली को समायोजित और अनुकूलित किया जाना चाहिए, यदि आपको तकनीकी सहायता की आवश्यकता है, तो कृपया संपर्क करें हमारी कंपनी।
