डीएनए एक्सट्रैक्शन मिनी किट
यह किट अनुकूलित बफर सिस्टम और सिलिका जेल कॉलम शुद्धि तकनीक को अपनाती है, जो टीएई या टीबीई एगरोज़ जेल की विभिन्न सांद्रता से 70 बीपी - 20 केबी डीएनए टुकड़े पुनर्प्राप्त कर सकती है।डीएनए सोखना स्तंभ विशेष रूप से उच्च नमक की स्थिति में डीएनए को सोख सकता है।इसके अलावा, किट सीधे पीसीआर उत्पादों, एंजाइमेटिक प्रतिक्रिया प्रणालियों या अन्य तरीकों से प्राप्त कच्चे डीएनए उत्पादों से डीएनए टुकड़ों को शुद्ध कर सकती है, और प्रोटीन, अन्य कार्बनिक यौगिकों, अकार्बनिक नमक आयनों और ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड प्राइमर जैसी अशुद्धियों को हटा सकती है।यह सुनिश्चित कर सकता है कि शुद्धिकरण 10-15 मिनट के भीतर पूरा किया जा सकता है।शुद्ध डीएनए का उपयोग सीधे बंधाव, परिवर्तन, एंजाइम पाचन, इन विट्रो ट्रांसक्रिप्शन, पीसीआर, अनुक्रमण, माइक्रोइंजेक्शन आदि के लिए किया जा सकता है।
जमा करने की अवस्था
-15 ~ -25℃ पर स्टोर करें और कमरे के तापमान पर परिवहन करें।
अवयव
| अवयव | (100 आरएक्सएनएस) |
| बफर जीडीपी | 80 मि.ली |
| बफर जीडब्ल्यू | 2×20 मि.ली |
| एल्युशन बफ़र | 20 मि.ली |
| फास्टप्योर डीएनए मिनी कॉलम-जी | 100 |
बफर जीडीपी:डीएनए बाइंडिंग बफर.
बफर जीडब्ल्यू:धुलाई बफर;उपयोग से पहले बोतल पर संकेतित मात्रा के अनुसार पूर्ण इथेनॉल डालें।
एल्युशन बफर:क्षालन.
फास्टप्योर डीएनए मिनी कॉलम-जी:डीएनए सोखना कॉलम.
संग्रह ट्यूब 2 मिली:छानने के लिए संग्रह ट्यूब.
तैयार सामग्री
1.5 मिली निष्फल ट्यूब, पूर्ण इथेनॉल और आइसोप्रोपेनॉल (जब डीएनए टुकड़ा ≤100 बीपी, 1 मात्रा जोड़ें
आइसोप्रोपेनॉल से 1 मात्रा जेल), जल स्नान।
प्रयोग प्रक्रिया
उपयोग से पहले टैग पर बताए अनुसार बफर जीडब्ल्यू को पतला करने के लिए 80 मिलीलीटर इथेनॉल मिलाएं, कमरे के तापमान पर स्टोर करें।
तंत्र
1. पीसीआर प्रतिक्रिया समाधान
जेल निष्कर्षण योजना: समान मात्रा बफर जीडीपी पीसीआर प्रतिक्रिया समाधान पुनर्प्राप्ति योजना जोड़ें:5 गुना वॉल्यूम बफ़र जोड़ें
2. जीडीपी जेल की मात्रा की गणना करें (100 μएल 100 मिलीग्राम के बराबर है)
जेल घोलें
3. 50 ~ 55 पर पहले से गरम करें℃
4. बाइंड वॉश
बफर जीडीपी का 300 μL जोड़ें*
700 μL बफ़र GW जोड़ें
700 μL बफ़र GW जोड़ें
5. Elute
20 - 30μL एल्युशन बफर या विआयनीकृत पानी मिलाएं
टिप्पणियाँ* इस चरण के बिना पीसीआर प्रतिक्रिया द्रव पुनर्प्राप्ति
जेल निष्कर्षण कार्यक्रम
1. डीएनए टुकड़ों को विभाजित करने के लिए डीएनए वैद्युतकणसंचलन के बाद, यूवी प्रकाश के तहत एगरोज़ जेल से डीएनए टुकड़े की एकल पट्टी को बाहर निकालें।जेल की स्पष्ट नमी को अवशोषित करने और जितना संभव हो सके अतिरिक्त एग्रोस को हटाकर जेल स्लाइस के आकार को कम करने के लिए अवशोषक कागज का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है।इसकी मात्रा की गणना करने के लिए जेल स्लाइस (माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब के बिना) का वजन करें: 100 मिलीग्राम जेलस्लाइस की मात्रा लगभग 100 μL है, यह मानते हुए कि घनत्व 1g/ml है।
2. समान मात्रा में बफर जीडीपी जोड़ें, 7-10 मिनट के लिए 50 ~ 55 ℃ पर इनक्यूबेट करें (जेल आकार के अनुसार, जेल पूरी तरह से भंग होने तक इनक्यूबेशन समय समायोजित करें)।ऊष्मायन के दौरान ट्यूब को 2 बार पलटें।
Δ बफ़र जीडीपी के 1-3 वॉल्यूम जोड़ने से डीएनए पुनर्प्राप्ति दक्षता प्रभावित नहीं होगी।यदि डीएनए टुकड़े को पुनर्प्राप्त करना है <100 बीपी, तो बफर जीडीपी के 3 वॉल्यूम जोड़ने की आवश्यकता है;जब जेल का टुकड़ा पूरी तरह से घुल जाए, तो 1 मात्रा आइसोप्रोपेनॉल डालें और अच्छी तरह मिलाएं, फिर अगले चरण पर आगे बढ़ें।
3. नमूने को ट्यूब के नीचे लाने के लिए संक्षेप में सेंट्रीफ्यूज करें, फास्टप्योर डीएनए मिनी कॉलम-जी को कलेक्शन ट्यूब 2 मिलीलीटर में डालें, ध्यान से अधिकतम 700 μL समाधान को एक बार स्थानांतरित करें
निस्पंदन स्तंभों का समय, 30-60 सेकंड के लिए 12,000 आरपीएम (13,800 X ग्राम) पर अपकेंद्रित्र।
4. निस्पंद को त्यागें और कॉलम में 300 μL बफर जीडीपी जोड़ें, 1 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट करें, 30-60 सेकंड के लिए 12,000 आरपीएम (13,800 X ग्राम) पर सेंट्रीफ्यूज करें।
5. निस्पंदन को त्यागें और कॉलम में 700 μL बफर जीडब्ल्यू जोड़ें (जांचें कि क्या पूर्ण इथेनॉल पहले से जोड़ा गया है!), 30-60 सेकंड के लिए 12,000 आरपीएम (13,800 X ग्राम) पर सेंट्रीफ्यूज करें।
Δ कृपया सोखना स्तंभ की दीवार के चारों ओर बफर जीडब्ल्यू जोड़ें, या बफर जीडब्ल्यू बैक कवर जोड़ें और ट्यूब की दीवार पर चिपके नमक को पूरी तरह से साफ करने में मदद करने के लिए इसे 2 - 3 बार उल्टा मिलाएं।
6. चरण 5 दोहराएँ.
Δ बफर जीडब्ल्यू के साथ दो बार फ्लशिंग यह सुनिश्चित कर सकती है कि नमक पूरी तरह से हटा दिया गया है और बाद के प्रयोगों पर प्रभाव को खत्म कर दिया गया है।
7. निस्पंदन को हटा दें और खाली कॉलम को 2 मिनट के लिए 12,000 आरपीएम (13,800 X ग्राम) पर सेंट्रीफ्यूज करें।
8. कॉलम को एक साफ 1.5 मिली माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब में डालें, कॉलम झिल्ली के केंद्र में 20 - 30 μL एल्यूशन बफर डालें, 2 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें, और फिर 1 मिनट के लिए 12,000 आरपीएम (13,800 X ग्राम) पर सेंट्रीफ्यूज करें।कॉलम को त्यागें, प्राप्त डीएनए को -20 पर संग्रहीत करें।
Δ चरण 8 के सतह पर तैरनेवाला को फिर से एल्यूट करने के लिए कॉलम में स्थानांतरित करना और एल्यूशन बफर को 55 (जब डीएनए टुकड़ा>3 केबी) पर पहले से गरम करना पुनर्प्राप्ति दक्षता बढ़ाने में सहायक हो सकता है।
पीसीआर उत्पाद पुनर्प्राप्ति कार्यक्रम
यह प्रोटोकॉल पीसीआर उत्पादों, एंजाइमेटिक प्रतिक्रिया प्रणाली और अन्य डीएनए क्रूड उत्पादों (आनुवंशिक डीएनए सहित) से डीएनए अंशों को शुद्ध करने के लिए लागू है।यह समाधान विभिन्न न्यूक्लियोटाइड्स, प्राइमर, प्राइमर डिमर्स, नमक अणुओं, एंजाइमों और अन्य अशुद्धियों को कुशलतापूर्वक हटा सकता है।
1. संक्षेप में पीसीआर उत्पादों, एंजाइमैटिक प्रतिक्रिया समाधान और अन्य डीएनए क्रूड उत्पादों को अपकेंद्रित्र करें।पिपेट के साथ उनकी मात्रा का अनुमान लगाएं और एक निष्फल 1.5 मिलीलीटर या 2 मिलीलीटर ट्यूब में स्थानांतरित करें।100 μL तक की मात्रा तक ddH2O जोड़ें;जबकि उच्च सांद्रता वाले जीनोमिक डीएनए के लिए, ddH2O के साथ 300 μL तक पतला करने से पुनर्प्राप्ति दक्षता में सुधार करने में मदद मिलेगी।
2. बफर जीडीपी की 5 मात्राएं जोड़ें, उलटा या भंवर द्वारा अच्छी तरह मिलाएं।यदि रुचि का डीएनए टुकड़ा 100 बीपी से अधिक है, तो इथेनॉल की अतिरिक्त 1.5 मात्रा (नमूने + बफर जीडीपी) जोड़ने की आवश्यकता है।
3. कॉलम को वापस संग्रहण ट्यूब में डालें, मिश्रण को कॉलम में स्थानांतरित करें, 30 - 60 सेकंड के लिए 12,000 आरपीएम (13,800 ×g) पर सेंट्रीफ्यूज करें।यदि मिश्रित समाधान की मात्रा >700 µL है, तो सोखना स्तंभ को वापस संग्रह ट्यूब में डालें, शेष घोल को सोखना स्तंभ में स्थानांतरित करें, और 30 - 60 सेकंड के लिए 12,000 आरपीएम (13,800 × ग्राम) पर सेंट्रीफ्यूज करें।
4. अगला प्रदर्शन 08- 1/जेल निष्कर्षण कार्यक्रम के चरण 5-8 को संदर्भित करता है।
अनुप्रयोग
टीएई या टीबीई एगरोज़ जेल की विभिन्न सांद्रता;पीसीआर उत्पाद, एंजाइमेटिक प्रतिक्रिया प्रणाली या विभिन्न तरीकों से प्राप्त अन्य कच्चे डीएनए उत्पाद।बरामद टुकड़े से लेकर70 बीपी -20 केबी.
टिप्पणियाँ
केवल अनुसंधान के लिए उपयोग करें।नैदानिक प्रक्रियाओं के उपयोग में नहीं।
1. उपयोग से पहले टैग पर बताए अनुसार बफर जीडब्ल्यू को पतला करने के लिए 80 मिलीलीटर इथेनॉल मिलाएं, कमरे के तापमान पर स्टोर करें।
2. यदि कम तापमान वाले भंडारण के दौरान बफर जीडीपी का अवक्षेपण आसान है, तो इसे उपयोग से पहले कुछ समय के लिए कमरे के तापमान पर रखा जा सकता है।यदि आवश्यक हो, तो इसे 37℃ पानी के स्नान में पहले से गरम किया जा सकता है जब तक कि अवक्षेप पूरी तरह से घुल न जाए, और फिर मिश्रण के बाद इसका उपयोग किया जा सकता है।
3. पानी के स्नान का तापमान पहले से 50 ~55℃ पर सेट करें।
4. 08-1/जेल निष्कर्षण कार्यक्रम चरण 1 में, जेल स्लाइस के आकार को कम करने से घुलने का समय काफी कम हो जाएगा और पुनर्प्राप्ति दक्षता बढ़ जाएगी (उच्च तापमान पर लगातार उजागर होने पर रैखिक डीएनए आसानी से हाइड्रोलाइज हो जाता है)।डीएनए जेल को लंबे समय तक यूवी के संपर्क में न रखें, क्योंकि पराबैंगनी प्रकाश डीएनए को नुकसान पहुंचा सकता है।
5. जेल को 08- 1/जेल निष्कर्षण कार्यक्रम चरण 2 में पूरी तरह से घोलें, अन्यथा डीएनए पुनर्प्राप्ति दक्षता गंभीर रूप से प्रभावित होगी।
6. एल्यूशन बफ़र या ddH2O को 55℃ पर पहले से गर्म कर लें, जो डीएनए एल्यूशन दक्षता में सुधार करने में सहायक है।डीएनए को 2.5 एमएम ट्रिस-एचसीएल, पीएच 7.0 - 8.5 के एलुएंट में संग्रहित करने की सिफारिश की जाती है।
