DNase I (Rnase मुफ़्त)(5u/ul)
कैट नं: HC4007A
DNase I (डीऑक्सीराइबोन्यूक्लिज़ I) एक एंडोडॉक्सीराइबोन्यूक्लिज़ है जो एकल या डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए को पचा सकता है।यह 5'-टर्मिनल पर फॉस्फेट समूहों और 3'-टर्मिनल पर हाइड्रॉक्सिल के साथ मोनोडीऑक्सीन्यूक्लियोटाइड्स या सिंगल- या डबल-स्ट्रैंडेड ऑलिगोडॉक्सीन्यूक्लियोटाइड्स का उत्पादन करने के लिए फॉस्फोडाइस्टर बॉन्ड को पहचानता है और तोड़ता है।DNase I की गतिविधि Ca पर निर्भर करती है2+और इसे एमएन जैसे द्विसंयोजक धातु आयनों द्वारा सक्रिय किया जा सकता है2+और Zn2+.5 एमएम सीए2+एंजाइम को हाइड्रोलिसिस से बचाता है।एमजी की उपस्थिति में2+, एंजाइम बेतरतीब ढंग से डीएनए के किसी भी स्ट्रैंड पर किसी भी साइट को पहचान और तोड़ सकता है।एमएन की उपस्थिति में2+डीएनए के दोहरे स्ट्रैंड को एक साथ पहचाना जा सकता है और लगभग एक ही स्थान पर विभाजित करके फ्लैट सिरे वाले डीएनए टुकड़े या चिपचिपे सिरे वाले डीएनए टुकड़े बनाए जा सकते हैं, जिनमें 1-2 न्यूक्लियोटाइड उभरे हुए होते हैं।
अवयव
| नाम | 0.1KU | 1केयू | 5 कु | 50 केयू |
| DNase I, RNase-मुक्त | 20μL | 200μL | 1एमएल | 10 एमएल |
| 10×DNase I बफ़र | 1एमएल | 1एमएल | 5 × 1 एमएल | 5×10 एमएल |
जमा करने की अवस्था
भंडारण के लिए -25℃~-15℃;आइस पैक के तहत परिवहन.
निर्देश
1. नीचे सूचीबद्ध अनुपात के अनुसार RNase-मुक्त ट्यूब में प्रतिक्रिया समाधान तैयार करें:
| अवयव | आयतन |
| शाही सेना | एक्स माइक्रोग्राम |
| 10 × DNase I बफ़र | 1μL |
| DNase I, RNase-मुक्त(5U/μL) | 1 यू प्रति माइक्रोग्राम आरएनए① |
| डीडीएच2O | 10μL तक |
नोट: ①RNA की मात्रा के आधार पर DNase I की मात्रा की गणना करें जिसे जोड़ने की आवश्यकता है।
2. 15 मिनट के लिए 37 ℃;
3. 2.5mM~5mM की अंतिम सांद्रता में 0.5M EDTA जोड़ें, और प्रतिक्रिया को रोकने के लिए 10 मिनट के लिए 65℃ पर गर्म करें।नमूने का उपयोग सीधे अगली प्रतिक्रिया जैसे रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन के लिए किया जा सकता हैप्रयोग।
इकाई परिभाषा
एक इकाई को एंजाइम की मात्रा के रूप में परिभाषित किया गया है जो 1µg pBR322 को पूरी तरह से विघटित कर देगा37℃ पर 10 मिनट में डीएनए।
गुणवत्ता नियंत्रण
आरएनएसई:37℃ पर 4 घंटे के लिए 1.6μg MS2 RNA के साथ DNase I का 5U कोई क्षरण नहीं देता हैएगरोज़ जेल वैद्युतकणसंचलन द्वारा निर्धारित।
टिप्पणियाँ
1. कृपया स्वयं 0.5MEDTA तैयार करें।
2. आरएनए के प्रति μg पर 1U DNase I का उपयोग करें।हालाँकि, यदि RNA 1µg से कम है, तो कृपया 1U DNase I का उपयोग करें।
3. कृपया ऑपरेशन के दौरान एंजाइम को बर्फ पर रखें।
