वायरल डीएनए/आरएनए एक्सट्रैक्शन किट
यह किट नासॉफिरिन्जियल स्वैब, पर्यावरण स्वैब, सेल कल्चर सुपरनैटेन्ट और टिश्यू होमोजेनेट सुपरनैटेन्ट जैसे नमूनों से उच्च शुद्धता वाले वायरल डीएनए/आरएनए के तेजी से निष्कर्षण के लिए उपयुक्त है।यह किट सिलिका झिल्ली शुद्धि तकनीक पर आधारित है जो उच्च गुणवत्ता वाले वायरल डीएनए/आरएनए को निकालने के लिए फिनोल/क्लोरोफॉर्म कार्बनिक सॉल्वैंट्स या समय लेने वाली अल्कोहल वर्षा का उपयोग करने की आवश्यकता को समाप्त करती है।प्राप्त न्यूक्लिक एसिड अशुद्धियों से मुक्त हैं और रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन, पीसीआर, आरटी-पीसीआर, वास्तविक समय पीसीआर, अगली पीढ़ी अनुक्रमण (एनजीएस), और उत्तरी ब्लॉट जैसे डाउनस्ट्रीम प्रयोगों में उपयोग के लिए तैयार हैं।
जमा करने की अवस्था
15 ~ 25℃ पर स्टोर करें, और कमरे के तापमान पर परिवहन करें
अवयव
| अवयव | 100RXNS |
| बफर वी.एल | 50 मि.ली |
| बफर आरडब्ल्यू | 120 मि.ली |
| RNase-मुक्त ddH2 O | 6 मिली |
| फास्टप्योर आरएनए कॉलम | 100 |
| संग्रह ट्यूब (2 मि.ली.) | 100 |
| RNase-मुक्त संग्रह ट्यूब (1 .5 मि.ली.) | 100 |
बफर वीएल:लाइसिस और बाइंडिंग के लिए एक वातावरण प्रदान करें।
बफर आरडब्ल्यू:अवशिष्ट प्रोटीन और अन्य अशुद्धियाँ निकालें।
RNase मुक्त ddH2O:स्पिन कॉलम में झिल्ली से डीएनए/आरएनए को हटा दें।
फास्टप्योर आरएनए कॉलम:विशेष रूप से डीएनए/आरएनए को सोखना।
संग्रह ट्यूब 2 मिली:छानकर इकट्ठा करें.
RNase-मुक्त संग्रह ट्यूब 1.5 मिली:डीएनए/आरएनए एकत्रित करें।
अनुप्रयोग
नासॉफिरिन्जियल स्वैब, पर्यावरणीय स्वैब, सेल कल्चर सुपरनैटेन्ट, और टिश्यू होमोजेनेट सुपरनैटेन्ट।
स्व-तैयार मेटरials
RNase-मुक्त पिपेट टिप्स, 1.5 मिली RNase-मुक्त सेंट्रीफ्यूज ट्यूब, सेंट्रीफ्यूज, भंवर मिक्सर और पिपेट।
प्रयोग प्रक्रिया
जैव सुरक्षा कैबिनेट में निम्नलिखित सभी चरण निष्पादित करें।
1. नमूने का 200 μl एक RNase-मुक्त सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में जोड़ें (अपर्याप्त नमूना के मामले में पीबीएस या 0.9% NaCl के साथ बनाएं), बफर वीएल के 500 μl जोड़ें, 15 - 30 सेकंड के लिए भंवर द्वारा अच्छी तरह मिलाएं, और सेंट्रीफ्यूज करें मिश्रण को ट्यूब के नीचे संक्षेप में इकट्ठा करने के लिए।
2. फास्टप्योर आरएनए कॉलम को 2 मिली कलेक्शन ट्यूब में रखें।मिश्रण को चरण 1 से फास्टप्योर आरएनए कॉलम में स्थानांतरित करें, 1 मिनट के लिए 12,000 आरपीएम (13,400 × ग्राम) पर सेंट्रीफ्यूज करें, और छान लें।
3. फास्टप्योर आरएनए कॉलम में 600 μl बफर आरडब्ल्यू जोड़ें, 30 सेकंड के लिए 12,000 आरपीएम (13,400 × ग्राम) पर सेंट्रीफ्यूज करें, और फ़िल्टर को हटा दें।
4. चरण 3 दोहराएँ.
5. खाली कॉलम को 2 मिनट के लिए 12,000 आरपीएम (13,400 × ग्राम) पर सेंट्रीफ्यूज करें।
6. फास्टप्योर आरएनए कॉलम को सावधानी से एक नए RNase-मुक्त कलेक्शन ट्यूब 1.5 मिली (किट में उपलब्ध) में स्थानांतरित करें, और कॉलम को छुए बिना झिल्ली के केंद्र में 30 - 50 μl RNase-मुक्त ddH2O जोड़ें।1 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर खड़े रहने दें और 1 मिनट के लिए 12,000 आरपीएम (13,400 × ग्राम) पर सेंट्रीफ्यूज करें।
7. फास्टप्योर आरएनए कॉलम को त्यागें।डीएनए/आरएनए का उपयोग सीधे बाद की जांच के लिए किया जा सकता है, या छोटी अवधि के लिए -30 ~ -15 डिग्री सेल्सियस पर या लंबी अवधि के लिए -85 ~ -65 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जा सकता है।
टिप्पणियाँ
केवल अनुसंधान के लिए उपयोग करें।नैदानिक प्रक्रियाओं के उपयोग में नहीं।
1. नमूनों को पहले से कमरे के तापमान पर संतुलित करें।
2. वायरस अत्यधिक संक्रामक होते हैं।कृपया सुनिश्चित करें कि प्रयोग से पहले सभी आवश्यक सुरक्षा सावधानियां बरती जाएं।
3. नमूने को बार-बार जमने और पिघलाने से बचें, क्योंकि इससे निकाले गए वायरल डीएनए/आरएनए का क्षरण हो सकता है या उपज कम हो सकती है।
4. स्व-तैयार उपकरण में RNase-मुक्त पिपेट युक्तियाँ, 1.5 ml RNase-मुक्त सेंट्रीफ्यूज ट्यूब, सेंट्रीफ्यूज, भंवर मिक्सर और पिपेट शामिल हैं।
5. किट का उपयोग करते समय, एक लैब कोट, डिस्पोजेबल लेटेक्स दस्ताने और एक डिस्पोजेबल मास्क पहनें और RNase संदूषण के जोखिम को कम करने के लिए RNase मुक्त उपभोग्य सामग्रियों का उपयोग करें।
6. जब तक अन्यथा निर्दिष्ट न हो, सभी चरण कमरे के तापमान पर करें।
तंत्र एवं कार्यप्रवाह
