अल्ट्रा न्यूक्लिज़
अल्ट्रान्यूक्लिज़ एक आनुवंशिक रूप से इंजीनियर्डेन्डोन्यूक्लेज़ है जो सेराटिया मार्सेसेन्स से प्राप्त होता है, जो डीएनए या आरएनए को ख़राब करने में सक्षम है, या तो डबल या सिंगल स्ट्रैंडेड, रैखिक या गोलाकार स्थिति की एक विस्तृत श्रृंखला के तहत, न्यूक्लिक एसिड को 3-5बेस लंबाई के साथ 5'-मोनोफॉस्फेट ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स में पूरी तरह से ख़राब कर देता है। .आनुवंशिक इंजीनियरिंग संशोधन के बाद, उत्पाद को एस्चेरिचिया कोली (ई. कोली) में किण्वित, अभिव्यक्त और शुद्ध किया गया, जो वैज्ञानिक अनुसंधान में सेल सतह पर तैरनेवाला और सेल लाइसेट की चिपचिपाहट को कम करता है, लेकिन प्रोटीन की शुद्धि दक्षता और कार्यात्मक अनुसंधान में भी सुधार करता है।इसका उपयोग जीन थेरेपी, वायरस शुद्धि, वैक्सीन उत्पादन, प्रोटीन और पॉलीसेकेराइड फार्मास्युटिकल उद्योग में मेजबान अवशेष न्यूक्लिक एसिड हटाने वाले अभिकर्मक के रूप में भी किया जा सकता है।
उत्पाद की विशेषताएँ
| CAS संख्या। | 9025-65-4 |
| ईसी नं. | |
| आणविक वजन | 30kDa |
| समविभव बिंदु | 6.85 |
| प्रोटीन शुद्धता | ≥99%（ एसडीएस-पेज और एसईसी-एचपीएलसी） |
| निश्चित गतिविधि | ≥1.1×106यू/मिलीग्राम |
| इष्टतम तापमान | 37°से |
| इष्टतम पीएच | 8.0 |
| प्रोटीज़एक्टिविटी | नकारात्मक |
| जैव बोझ | ＜10सीएफयू/100,000यू |
| अवशिष्ट मेजबान-कोशिका प्रोटीन | ≤10पीपीएम |
| भारी धातु | ≤10पीपीएम |
| बैक्टीरियल एंडोटॉक्सिन | ＜0.25EU/1000U |
| भंडारण बफ़र | 20एमएम ट्रिस-एचसीएल, पीएच 8.0, 2एमएम एमजीसीएल2, 20एमएम NaCl ，50% ग्लिसरॉल |
जमा करने की अवस्था
≤0°C परिवहन；-25~-15°C भंडारण，2 वर्ष की वैधता (ठंड-पिघलने से बचें)।
इकाई परिभाषा
37 डिग्री सेल्सियस, पीएच 8.0 पर 30 मिनट के भीतर △A260 के अवशोषण मूल्य को 1.0 से बदलने के लिए उपयोग की जाने वाली एंजाइम की मात्रा, ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स में कटौती करके पचाए गए 37μg सैल्मन शुक्राणु डीएनए के बराबर, को एक सक्रिय इकाई (यू) के रूप में परिभाषित किया गया था।
गुणवत्ता नियंत्रण
अवशिष्ट मेजबान-कोशिका प्रोटीन: एलिसा किट
•प्रोटीज अवशेष: 250KU/mL UltraNuclease ने सब्सट्रेट के साथ 60 मिनट तक प्रतिक्रिया की, कोई गतिविधि नहीं पाई गई।
•बैक्टीरियल एंडोटॉक्सिन: एलएएल-टेस्ट, पीपुल्स रिपब्लिक ऑफ चाइना का फार्माकोपिया खंड 4 (2020 संस्करण) जेल सीमा परीक्षण विधि।सामान्य नियम (1143)।
•बायोबर्डन: पीपुल्स रिपब्लिक ऑफ चाइना का फार्माकोपिया खंड 4 (2020 संस्करण)- सामान्य
बाँझपन परीक्षण के नियम (1101), पीआरसी राष्ट्रीय मानक, जीबी 4789.2-2016।
•भारी धातु:आईसीपी-एईएस, एचजे776-2015।
संचालन
जब एसडीएस सांद्रता 0.1% या ईडीटीए से अधिक थी तो अल्ट्रान्यूक्लिज़ गतिविधि काफी हद तक बाधित हो गई थी
सांद्रता 1 एमएम से अधिक थी। सर्फ़ेक्टेंट ट्राइटन एक्स- 100, ट्वेन 20 और ट्वेन 80 का न्यूक्लीज़ पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा
गुण जब एकाग्रता 1.5% से कम थी।
| संचालन | इष्टतम संचालन | वैध संचालन |
| तापमान | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0- 11.0 |
| Mg2+ | 1-2 मिमी | 1- 15 मिमी |
| डीटीटी | 0- 100 मिमी | >100एमएम |
| 2-मर्केप्टोइथेनाल | 0- 100 मिमी | >100एमएम |
| मोनोवैलेंट धातु आयन (Na+, K+ आदि) | 0-20 मिमी | 0-200 मिमी |
| पीओ43- | 0- 10 मिमी | 0- 100 मिमी |
उपयोग एवं खुराक
• वैक्सीन उत्पादों से बहिर्जात न्यूक्लिक एसिड निकालें, अवशिष्ट न्यूक्लिक एसिड विषाक्तता के जोखिम को कम करें और उत्पाद सुरक्षा में सुधार करें।
• न्यूक्लिक एसिड के कारण होने वाले फ़ीड तरल की चिपचिपाहट को कम करें, प्रसंस्करण समय को कम करें और प्रोटीन की उपज बढ़ाएं।
• न्यूक्लिक एसिड को हटा दें जो कण (वायरस, समावेशन शरीर, आदि) को लपेटता है, जो अनुकूल है
कण की रिहाई और शुद्धि के लिए.
| प्रायोगिक प्रकार | प्रोटीन उत्पादन | वायरस, वैक्सीन | सेल ड्रग्स |
| कक्ष क्रमांक | 1 ग्राम सेल गीला वजन (10एमएल बफर के साथ पुनः निलंबित) | 1L किण्वन तरल सतह पर तैरनेवाला | 1L संस्कृति |
| न्यूनतम खुराक | 250यू | 100यू | 100यू |
| अनुशंसित खुराक | 2500U | 25000U | 5000U |
• न्यूक्लिज़ उपचार कॉलम क्रोमैटोग्राफी, इलेक्ट्रोफोरेसिस और ब्लॉटिंग विश्लेषण के लिए नमूने के रिज़ॉल्यूशन और रिकवरी में सुधार कर सकता है।
• जीन थेरेपी में, शुद्ध एडेनो-जुड़े वायरस प्राप्त करने के लिए न्यूक्लिक एसिड को हटा दिया जाता है।
