रोबस्टार्ट टैक डीएनए पोलीमरेज़
रोबस्टार्ट टैक डीएनए पोलीमरेज़ एक हॉट स्टार्ट डीएनए पोलीमरेज़ है।यह उत्पाद न केवल पीसीआर प्रणाली की तैयारी और प्रवर्धन की प्रक्रिया में प्राइमरों या प्राइमर एकत्रीकरण की गैर-विशिष्ट एनीलिंग के कारण होने वाली गैर-विशिष्ट प्रतिक्रिया को बेहतर ढंग से रोक सकता है।इसलिए, इसमें उत्कृष्ट विशिष्टता है और यह कम सांद्रता टेम्पलेट्स के प्रवर्धन के लिए अधिक प्रभावी है, और यह मल्टीप्लेक्स पीसीआर प्रवर्धन प्रतिक्रिया के लिए उपयुक्त है।इसके अलावा, इस उत्पाद की प्रयोज्यता बहुत अच्छी है, और विभिन्न प्रकार की पीसीआर प्रतिक्रियाओं में स्थिर प्रवर्धन परिणाम प्राप्त किए जा सकते हैं।
अवयव
1.5 यू/μL रोबस्टार्ट टैक डीएनए पोलीमरेज़
2.10 × पीसीआर बफर II (एमजी²+ मुफ़्त) (वैकल्पिक)
3.25 एमएम एमजीसीएल2(वैकल्पिक)
* 10 × पीसीआर बफर II (एमजी²+ मुक्त) में डीएनटीपी और एमजी²+ नहीं है, कृपया डीएनटीपी और एमजीसीएल जोड़ें2प्रतिक्रिया प्रणाली तैयार करते समय।
अनुशंसित अनुप्रयोग
1.तीव्र प्रवर्धन.
2.एकाधिक प्रवर्धन.
3.रक्त, स्वाब और अन्य नमूनों का प्रत्यक्ष प्रवर्धन।
4.श्वसन संबंधी रोगों का पता लगाना।
गोदाम की स्थिति
दीर्घकालिक भंडारण के लिए -20°C, उपयोग से पहले अच्छी तरह मिलाया जाना चाहिए, बार-बार जमने-पिघलने से बचें।
*यदि प्रशीतन के बाद वर्षा होती है, तो यह सामान्य है;मिश्रण और उपयोग से पहले इसे कमरे के तापमान पर संतुलित करने की सिफारिश की जाती है।
इकाई परिभाषा
एक सक्रिय इकाई (यू) को एंजाइम की मात्रा के रूप में परिभाषित किया गया है जो टेम्प्लेट/प्राइमर के रूप में सक्रिय सैल्मन शुक्राणु डीएनए का उपयोग करके 30 मिनट के लिए 74 डिग्री सेल्सियस पर एसिड-अघुलनशील सामग्री में 10 एनएम डीऑक्सीराइबोन्यूक्लियोटाइड को शामिल करता है।
गुणवत्ता नियंत्रण
1.एसडीएस-पेज इलेक्ट्रोफोरेटिक शुद्धता 98% से अधिक।
2.प्रवर्धन संवेदनशीलता, बैच-टू-बैच नियंत्रण, स्थिरता।
3.कोई बहिर्जात न्यूक्लिअस गतिविधि नहीं, कोई बहिर्जात एंडोन्यूक्लिज़ या एक्सोन्यूक्लिज़ संदूषण नहीं
निर्देश
प्रतिक्रिया सेटअप
| अवयव | आयतन (μL) | अंतिम एकाग्रता |
| 10 × पीसीआर बफर II (एमजी²+ मुफ़्त)a | 5 | 1× |
| dNTPs (10mM प्रत्येक dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 एमएम एमजीसीएल2 | 2-8 | 1-4 मिमी |
| रोबस्टार्ट टैक डीएनए पोलीमरेज़ (5U/μL) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 यू |
| 25 × प्राइमर मिश्रणबी | 2 | 1× |
| खाका | - | ＜ 1 μg/प्रतिक्रिया |
| डीडीएच2O | 50 तक | - |
टिप्पणियाँ:
1)ए.बफ़र में dNTP और Mg²+ नहीं है, कृपया dNTPs और MgCl जोड़ें2प्रतिक्रिया प्रणाली तैयार करते समय।
2) बी.यदि क्यूपीसीआर/क्यूआरटी-पीसीआर के लिए उपयोग किया जाता है, तो प्रतिक्रिया प्रणाली में फ्लोरोसेंट जांच को जोड़ा जाना चाहिए।आमतौर पर, 0.2 μM की अंतिम प्राइमर सांद्रता अच्छे परिणाम देगी;यदि प्रतिक्रिया प्रदर्शन खराब है, तो प्राइमर एकाग्रता को 0.2-1 μM की सीमा में समायोजित किया जा सकता है।जांच सांद्रता आमतौर पर 0.1-0.3 μM की सीमा में अनुकूलित होती है।प्राइमर और जांच का सर्वोत्तम संयोजन खोजने के लिए एकाग्रता ढाल प्रयोग किए जा सकते हैं।
थर्मल साइकलिंग प्रोटोकॉल
| नियमित पीसीआरप्रक्रिया | |||
| कदम | तापमान | समय | साइकिल |
| पूर्व विकृतीकरण | 95℃ | 1-5 मिनट | 1 |
| विकृतीकरण | 95℃ | 10-20 सेकंड | 40-50 |
| एनीलिंग/विस्तार | 56-64℃ | 20-60 सेकंड | |
| तेज़ पीसीआरप्रक्रिया | |||
| कदम | तापमान | समय | साइकिल |
| पूर्व विकृतीकरण | 95℃ | 30 सेकंड | 1 |
| विकृतीकरण | 95℃ | 1-5 सेकंड | 40-45 |
| एनीलिंग/विस्तार | 56-64℃ | 5-20 सेकंड | |
टिप्पणियाँ
1.तेज़ डीएनए पोलीमरेज़ की प्रवर्धन दर 1 kb/10 s से कम नहीं होनी चाहिए।विभिन्न पीसीआर उपकरणों के तापमान में वृद्धि और गिरावट की दर, तापमान नियंत्रण मोड और गर्मी संचालन दक्षता काफी भिन्न होती है, इसलिए विशिष्ट तेज़ पीसीआर उपकरण के लिए इष्टतम प्रतिक्रिया स्थितियों को अनुकूलित करने की अनुशंसा की जाती है।
2.यह प्रणाली उच्च विशिष्टता और संवेदनशीलता के साथ अत्यधिक अनुकूलनीय है।
3.उच्च संवेदनशीलता पीसीआर डिटेक्शन अभिकर्मकों के रूप में उपयोग के लिए उपयुक्त, और मल्टीप्लेक्स पीसीआर प्रवर्धन प्रतिक्रियाओं में उपयोग किया जा सकता है।
4.5′→3′ पोलीमरेज़ गतिविधि, 5′→3′ एक्सोन्यूक्लिज़ गतिविधि;संख्या 3′→5′ एक्सोन्यूक्लिज़ गतिविधि;कोई प्रूफ़रीडिंग फ़ंक्शन नहीं.
5.पीसीआर और आरटी-पीसीआर के गुणात्मक और मात्रात्मक परीक्षण के लिए उपयुक्त।
6.पीसीआर उत्पाद का 3′ सिरा A है, जिसे सीधे T वेक्टर में क्लोन किया जा सकता है।
7.कम एनीलिंग तापमान वाले प्राइमरों के लिए या 200 बीपी से अधिक लंबे टुकड़ों के प्रवर्धन के लिए तीन-चरणीय विधि की सिफारिश की जाती है।
