माउस जीनोटाइपिंग किट
कैट नंबर: HCR2021A
यह उत्पाद एक किट है जिसे डीएनए क्रूड निष्कर्षण और पीसीआर प्रवर्धन प्रणाली सहित माउस जीनोटाइप की तेजी से पहचान के लिए डिज़ाइन किया गया है।उत्पाद का उपयोग लाइसिस बफर और प्रोटीनेज़ के द्वारा सरल दरार के बाद सीधे माउस पूंछ, कान, पैर की अंगुली और अन्य ऊतकों से पीसीआर प्रवर्धन के लिए किया जा सकता है।रात भर पाचन, फिनोल-क्लोरोफॉर्म निष्कर्षण या स्तंभ शुद्धि नहीं, जो सरल है और प्रयोगों में लगने वाला समय कम करता है।यह उत्पाद 2केबी तक लक्ष्य अंशों के प्रवर्धन और 3 जोड़े प्राइमर के साथ मल्टीप्लेक्स पीसीआर प्रतिक्रियाओं के लिए उपयुक्त है।2×माउस टिश्यू डायरेक्ट पीसीआर मिक्स में आनुवंशिक रूप से इंजीनियर डीएनए पोलीमरेज़, एमजी शामिल है2+, डीएनटीपी और उच्च प्रवर्धन दक्षता और अवरोधक सहनशीलता प्रदान करने के लिए एक अनुकूलित बफर सिस्टम, ताकि टेम्पलेट और प्राइमर जोड़कर और उत्पाद को 1× पर रीहाइड्रेट करके पीसीआर प्रतिक्रियाएं की जा सकें।इस उत्पाद के साथ प्रवर्धित पीसीआर उत्पाद में 3′ सिरे पर एक प्रमुख "ए" आधार होता है और शुद्धिकरण के बाद सीधे टीए क्लोनिंग के लिए इसका उपयोग किया जा सकता है।
अवयव
| अवयव | आकार |
| 2×माउस टिश्यू डायरेक्ट पीसीआर मिक्स | 5×1.0mL |
| लिसेस बफ़र | 2×20mL |
| प्रोटीनेज के | 800μL |
जमा करने की अवस्था
उत्पादों को 2 वर्षों के लिए -25~-15℃ पर संग्रहित किया जाना चाहिए।पिघलने के बाद, Lysis बफर को अल्पकालिक एकाधिक उपयोग के लिए 2 ~ 8 ℃ पर संग्रहीत किया जा सकता है, और उपयोग करते समय अच्छी तरह से मिलाया जा सकता है।
आवेदन
यह उत्पाद माउस नॉकआउट विश्लेषण, ट्रांसजेनिक डिटेक्शन, जीनोटाइपिंग आदि के लिए उपयुक्त है।
विशेषताएँ
1.सरल ऑपरेशन: जीनोमिक डीएनए निकालने की कोई आवश्यकता नहीं;
2.व्यापक अनुप्रयोग: विभिन्न माउस ऊतकों के प्रत्यक्ष प्रवर्धन के लिए उपयुक्त।
निर्देश
1.जीनोमिक डीएनए का विमोचन
1) लाइसेट की तैयारी
ऊतक लाइसेट को लाइज़ किए जाने वाले माउस नमूनों की संख्या के अनुसार तैयार किया जाता है (ऊतक लाइसेट को खुराक के अनुसार साइट पर तैयार किया जाना चाहिए और उपयोग के लिए अच्छी तरह मिलाया जाना चाहिए), और एक नमूने के लिए आवश्यक अभिकर्मकों का अनुपात इस प्रकार है:
| अवयव | आयतन (μL) |
| प्रोटीनेज के | 4 |
| लिसेस बफ़र | 200 |
2) नमूना तैयार करना और विश्लेषण
अनुशंसित ऊतक उपयोग
| के प्रकारऊतक | अनुशंसित मात्रा |
| चूहे की पूँछ | 1-3 मिमी |
| चूहे का कान | 2-5 मिमी |
| माउस पैर की अंगुली | 1-2 टुकड़े |
स्वच्छ सेंट्रीफ्यूज ट्यूबों में उचित मात्रा में माउस ऊतक के नमूने लें, प्रत्येक सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में 200μL ताजा ऊतक लाइसेट डालें, भंवर करें और हिलाएं, फिर 30 मिनट के लिए 55℃ पर सेते हैं, और फिर 3 मिनट के लिए 98℃ पर गर्म करें।
3) सेंट्रीफ्यूजेशन
लाइसेट को अच्छी तरह से हिलाएं और 5 मिनट के लिए 12,000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज करें।सतह पर तैरनेवाला का उपयोग पीसीआर प्रवर्धन के लिए टेम्पलेट के रूप में किया जा सकता है।यदि भंडारण के लिए टेम्पलेट की आवश्यकता है, तो सतह पर तैरनेवाला को किसी अन्य बाँझ सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में स्थानांतरित करें और 2 सप्ताह के लिए -20℃ पर स्टोर करें।
2.पीसीआर प्रवर्धन
2×माउस टिश्यू डायरेक्ट पीसीआर मिक्स को -20℃ से निकालें और बर्फ पर पिघलाएं, उल्टा मिलाएं और निम्नलिखित तालिका के अनुसार पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली तैयार करें (बर्फ पर काम करें):
| अवयव | 25μLप्रणाली | 50μLप्रणाली | अंतिम एकाग्रता |
| 2×माउस टिश्यू डायरेक्ट पीसीआर मिक्स | 12.5μL | 25μL | 1× |
| प्राइमर 1 (10μM) | 1.0μL | 2.0μL | 0.4μM |
| प्राइमर 2 (10μM) | 1.0μL | 2.0μL | 0.4μM |
| दरार उत्पादa | आवश्यकतानुसार | आवश्यकतानुसार |
|
| डीडीएच2O | 25μL तक | 50μL तक |
|
टिप्पणी:
ए) जोड़ी गई मात्रा सिस्टम के 1/10 से अधिक नहीं होनी चाहिए, और यदि बहुत अधिक जोड़ी जाती है, तो पीसीआर प्रवर्धन बाधित हो सकता है।
अनुशंसित पीसीआर शर्तें
| साइकिल कदम | अस्थायी. | समय | साइकिल |
| प्रारंभिक विकृतीकरण | 94℃ | 5 मिनट | 1 |
| विकृतीकरण | 94℃ | 30 सेकंड | 35-40 |
| एनीलिंगa | टीएम+3~5℃ | 30 सेकंड | |
| विस्तार | 72℃ | 30 सेकंड/केबी | |
| अंतिम विस्तार | 72℃ | 5 मिनट | 1 |
| - | 4℃ | पकड़ना | - |
टिप्पणी:
ए) एनीलिंग तापमान: प्राइमर के टीएम मान के संदर्भ में, एनीलिंग तापमान को प्राइमर के छोटे टीएम मान +3~5℃ पर सेट करने की सिफारिश की जाती है।
सामान्य समस्याएँ एवं समाधान
1.कोई लक्षित पट्टियाँ नहीं
1) अत्यधिक लसीका उत्पाद।टेम्पलेट की सबसे उपयुक्त मात्रा चुनें, आमतौर पर सिस्टम के 1/10 से अधिक नहीं;
2) बहुत बड़ा नमूना आकार.लाइसेट को 10 बार पतला करें और फिर नमूना आकार बढ़ाएं या कम करें और पुनः विश्लेषण करें;
3) ऊतक के नमूने ताज़ा नहीं हैं।ताजा ऊतक के नमूनों का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है;
4) प्राइमर की खराब गुणवत्ता।प्राइमर गुणवत्ता को सत्यापित करने और प्राइमर डिज़ाइन को अनुकूलित करने के लिए प्रवर्धन के लिए जीनोमिक डीएनए का उपयोग करें।
2.गैर-विशिष्ट प्रवर्धन
1) एनीलिंग तापमान बहुत कम है और चक्र संख्या बहुत अधिक है।एनीलिंग तापमान बढ़ाएँ और चक्रों की संख्या कम करें;
2) टेम्पलेट एकाग्रता बहुत अधिक है.प्रवर्धन के बाद टेम्प्लेट की मात्रा कम करें या टेम्प्लेट को 10 गुना पतला करें;
3) ख़राब प्राइमर विशिष्टता।प्राइमर डिज़ाइन को अनुकूलित करें.
टिप्पणियाँ
1.नमूनों के बीच क्रॉस संदूषण से बचने के लिए, कई नमूना उपकरण तैयार किए जाने चाहिए, और यदि बार-बार उपयोग की आवश्यकता हो तो प्रत्येक नमूने के बाद उपकरणों की सतह को 2% सोडियम हाइपोक्लोराइट समाधान या न्यूक्लिक एसिड क्लीनर से साफ किया जा सकता है।
2.ताजा माउस ऊतकों का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है, और प्रवर्धन परिणामों को प्रभावित करने से बचने के लिए नमूना मात्रा बहुत बड़ी नहीं होनी चाहिए।
3.लाइसिस बफ़र को बार-बार जमने-पिघलने से बचना चाहिए, और अल्पकालिक एकाधिक उपयोग के लिए 2 ~ 8 ℃ पर संग्रहीत किया जा सकता है।यदि कम तापमान पर संग्रहीत किया जाता है, तो वर्षा हो सकती है, और उपयोग से पहले इसे पूरी तरह से भंग कर दिया जाना चाहिए।
4.पीसीआर मिक्स को बार-बार जमने-पिघलने से बचना चाहिए, और अल्पकालिक बार-बार उपयोग के लिए 4℃ पर संग्रहीत किया जा सकता है।
5.यह उत्पाद केवल वैज्ञानिक प्रायोगिक अनुसंधान के लिए है और इसका उपयोग नैदानिक निदान या उपचार में नहीं किया जाना चाहिए।
