एम-एमएलवी रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस
रेवस्क्रिप्ट रिवर्स ट्रांस्क्रिप्टेज़ जेनेटिक इंजीनियरिंग तकनीक द्वारा प्राप्त किया जाता है।इसमें उच्च सीडीएनए संश्लेषण क्षमता, थर्मल स्थिरता और प्रतिक्रिया तापमान सीमा (60 डिग्री सेल्सियस तक) है।संश्लेषित सीडीएनए उत्पाद 10 केबी तक है।यह टेम्प्लेट की आत्मीयता को बढ़ाता है और जटिल माध्यमिक संरचना या कम प्रतिलिपि जीन वाले आरएनए टेम्प्लेट के रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन के लिए उपयुक्त है।
अवयव
| अवयव | HC2003बी (10,000यू) | HC2003बी (5*10,000यू) | HC2003बी (200,000यू) |
| रेवस्क्रिप्ट रिवर्स ट्रांस्क्रिप्टेज़ (200U/μL) | 50 μL | 5×50 μL | 1 एमएल |
| 5 × रेवस्क्रिप्ट बफर | 250 μL | 1.25 एमएल | 5 एमएल |
गोदाम की स्थिति
इस उत्पाद को 2 साल तक -25°C~-15°C पर संग्रहित किया जाना चाहिए।
इकाई परिभाषा
एक इकाई प्राइमर के रूप में ओलिगो (डीटी) का उपयोग करके 37 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट में एसिड-अघुलनशील सामग्री में 1 एनएमओएल डीटीटीपी शामिल करती है।
प्रतिक्रिया सेटअप
1.आरएनए टेम्पलेट का विकृतीकरण (यह चरण वैकल्पिक है, आरएनए टेम्पलेट का विकृतीकरण द्वितीयक संरचनाओं को खोलने में मदद करता है, जिससे पहले स्ट्रैंड सीडीएनए की उपज में सुधार होगा।)
| अवयव | आयतन (μL) |
| RNase निःशुल्क ddH2O | 13 तक |
| ओलिगो(डीटी)18 (50 μmol/L) या रैंडम प्राइमर (50 μmol/L) या जीन विशिष्ट प्राइमर (2 μmol/L) | 1 |
| या 1 | |
| या 1 | |
| आरएनए टेम्पलेट | X a |
टिप्पणियाँ:
1) ए: कुल आरएनए: 1-5 यूजी या एमआरएनए: 1-500 एनजी
2) 5 मिनट के लिए 65 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करना, फिर 2 मिनट के लिए ठंडा करने के लिए तुरंत बर्फ पर स्थानांतरित करना।प्रतिक्रिया तरल एकत्र करने के लिए संक्षिप्त सेंट्रीफ्यूजेशन, रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्रतिक्रिया समाधान जोड़ें जैसा कि निम्नलिखित तालिका में दिखाया गया है।मिश्रण करने के लिए धीरे से पिपेट करें।
1.प्रतिक्रिया मिश्रण की तैयारी (20 μL मात्रा)
| अवयव | आयतन (μL) |
| पिछले चरण का मिश्रण | 13 |
| 5×बफर | 4 |
| डीएनटीपी मिक्स (10nmol/L) | 1 |
| रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस (200 यू/μL) | 1 |
| RNase अवरोधक (40 यू/μL) | 1 |
1.निम्नलिखित परिस्थितियों में प्रतिक्रिया करें:
| तापमान (डिग्री सेल्सियस) | समय |
| 25 डिग्री सेल्सियसa | 5 मिनट |
| 42°सेb | 15-30 मिनट |
| 85 डिग्री सेल्सियसc | 5 मिनट |
टिप्पणियाँ:
1)ए.यादृच्छिक हेक्सामर्स का उपयोग करने के लिए केवल 5 मिनट के लिए 25°C पर इनक्यूबेटिंग की आवश्यकता होती है।ओलिगो (डीटी) का उपयोग करते समय कृपया इस चरण को छोड़ दें18या जीन विशिष्ट प्राइमर।
2) बी.अनुशंसित रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन तापमान 42 डिग्री सेल्सियस है, जटिल माध्यमिक संरचनाओं या उच्च जीसी सामग्री वाले टेम्पलेट्स के लिए, प्रतिक्रिया तापमान को 50-55 डिग्री सेल्सियस तक बढ़ाने की सिफारिश की जाती है।
3) सी.रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस को निष्क्रिय करने के लिए 5 मिनट के लिए 85°C पर गर्म करें।
4) उत्पाद को सीधे पीसीआर या क्यूपीसीआर प्रतिक्रियाओं में उपयोग किया जा सकता है, या अल्पकालिक भंडारण के लिए -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जा सकता है।उत्पादों को लंबे समय तक भंडारण के लिए अलग-अलग करके -80°C पर संग्रहित करने की अनुशंसा की जाती है।बार-बार जमने-पिघलने से बचें।
5) उत्पाद एक-चरण आरटी-क्यूपीसीआर के लिए उपयुक्त है, प्रत्येक 25μL प्रतिक्रिया प्रणाली के लिए 10-20 यू रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस जोड़ने या वास्तविक स्थिति के अनुसार धीरे-धीरे रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस की मात्रा बढ़ाने की सिफारिश की जाती है।
टिप्पणियाँ
1.कृपया प्रायोगिक क्षेत्र को साफ़ रखें;ऑपरेशन के दौरान साफ दस्ताने और मास्क पहनने चाहिए।RNase संदूषण को रोकने के लिए प्रयोग में उपयोग की जाने वाली सभी उपभोग्य वस्तुएं RNase मुक्त होनी चाहिए।
2.आरएनए क्षरण को रोकने के लिए सभी प्रक्रियाएं बर्फ पर की जानी चाहिए।
3.रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन की उच्च दक्षता सुनिश्चित करने के लिए उच्च गुणवत्ता वाले आरएनए नमूनों की सिफारिश की जाती है।
4.यह प्रॉडक्ट केवल शोध के उपयोग के लिए है।
5.कृपया अपनी सुरक्षा के लिए लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनकर काम करें।
