बीएसपीक्यूआई
बीएसपीक्यूआई को ई. कोलाई में पुनः संयोजक रूप से व्यक्त किया जा सकता है जो विशिष्ट साइटों को पहचान सकता है और इसके अंतर्गत उत्पादित होता है
BspQI, एक IIs प्रतिबंध एंडोन्यूक्लिज़ प्रतिबंध एंडोन्यूक्लिज़, एक पुनः संयोजक ई. कोली स्ट्रेन से प्राप्त होता है जो बैसिलस स्पैरिकस से क्लोन और संशोधित BspQI जीन को वहन करता है।यह विशिष्ट साइटों को पहचान सकता है, और पहचान अनुक्रम और क्लीवेज साइटें इस प्रकार हैं:
5' · · ·जीसीटीसीटीटीसी(एन) · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · सीजीएजीएजी(एनएनएनएन) · · · · 5'
उत्पाद की विशेषताएँ
1. उच्च गतिविधि, तेज़ पाचन;
2. कम स्टार गतिविधि, "स्केलपेल" जैसी सटीक कटिंग सुनिश्चित करना;
3. बीएसए और पशु-उत्पत्ति के बिना मुक्त;
मिथाइलेशन संवेदनशीलता
Dमैं मिथाइलेशन हूं:संवेदनशील नहीं;
Dसेमी मिथाइलेशन:संवेदनशील नहीं;
सीपीजी मिथाइलेशन:संवेदनशील नहीं;
जमा करने की अवस्था
उत्पाद को ≤ 0℃ भेजा जाना चाहिए;-25~-15℃ स्थिति पर स्टोर करें।
भंडारण बफ़र
20 एमएम ट्रिस-एचसीएल, 0.1 एमएम ईडीटीए, 500 एमएम केसीएल, 1.0 एमएम डाइथियोथेरिटोल, 500 माइक्रोग्राम/एमएल रीकॉम्बिनेंट एल्बुमिन, 0. 1% ट्राइशन एक्स- 100 और 50% ग्लिसरॉल (पीएच 7.0 @ 25 डिग्री सेल्सियस)।
इकाई परिभाषा
एक इकाई को 50 µL की कुल प्रतिक्रिया मात्रा में 50°C पर 1 घंटे में 1µg आंतरिक नियंत्रण डीएनए को पचाने के लिए आवश्यक एंजाइम की मात्रा के रूप में परिभाषित किया गया है।
गुणवत्ता नियंत्रण
प्रोटीन शुद्धता परख (एसडीएस-पेज):बीएसपीक्यूआई की शुद्धता एसडीएस-पेज विश्लेषण द्वारा ≥95% निर्धारित की गई थी।
आरएनएसई:50℃ पर 4 घंटे के लिए 1.6μg MS2 RNA के साथ BspQI का 10U कोई क्षरण नहीं देता है, जैसा कि एगरोज़ जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा निर्धारित किया गया है।
गैर-विशिष्ट DNase गतिविधि:16 घंटे के लिए 50℃ पर 1μg λ डीएनए के साथ BspQI का 10U, 1 घंटे के लिए 50℃ की तुलना में, एगरोज़ जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा निर्धारित कोई अतिरिक्त डीएनए नहीं देता है।
बंधाव और पुनः कटाई:10U BspQI के साथ 1 μg λDNA के पाचन के बाद, डीएनए टुकड़े को 16ºC पर T4 डीएनए लिगेज के साथ जोड़ा जा सकता है।और इन लिगेटेड टुकड़ों को बीएसपीक्यूआई के साथ दोबारा काटा जा सकता है।
ई कोलाई डीएनए: ई. कोलाई 16s आरडीएनए-विशिष्ट टाकमैन क्यूपीसीआर जांच से पता चला कि ई.कोली जीनोम अवशेष ≤ 0.1pg/ul है।
मेजबान प्रोटीन अवशेष:≤ 50 पीपीएम
जीवाणु एंडोटॉक्सिन: एलएएल-परीक्षण, चीनी फार्माकोपिया IV 2020 संस्करण के अनुसार, जेल सीमा परीक्षण विधि, सामान्य नियम (1143)।बैक्टीरियल एंडोटॉक्सिन सामग्री ≤10 ईयू/मिलीग्राम होनी चाहिए।
प्रतिक्रिया प्रणाली और शर्तें
| अवयव | आयतन |
| बीएसपीक्यू I(10 यू/μL) | 1 μL |
| डीएनए | 1 μg |
| 10 एक्स BspQ I बफर | 5 μL |
| डीडी एच2ओ | 50 μL तक |
प्रतिक्रिया की स्थिति：50℃, 1~16 घंटे.
ताप निष्क्रियता: 20 मिनट के लिए 80°C।
अनुशंसित प्रतिक्रिया प्रणाली और स्थितियाँ अपेक्षाकृत अच्छा एंजाइम पाचन प्रभाव प्रदान कर सकती हैं, जो केवल संदर्भ के लिए है, कृपया विवरण के लिए प्रयोगात्मक परिणाम देखें।
उत्पाद व्यवहार्यता
प्रतिबंध एंडोन्यूक्लाइज पाचन, तीव्र क्लोनिंग।
टिप्पणियाँ
1. एंजाइम की मात्रा ≤ प्रतिक्रिया मात्रा का 1/10।
2. स्टार गतिविधि तब हो सकती है जब ग्लिसरॉल सांद्रता 5% से अधिक हो।
3. दरार गतिविधि तब हो सकती है जब सब्सट्रेट अनुशंसित अनुपात से नीचे हो।
