वार्म स्टार्ट बीएसटी 2.0 डीएनए पोलीमरेज़ (ग्लिसरॉल मुक्त)
बीएसटी डीएनए पोलीमरेज़ V2 बैसिलस स्टीयरोथर्मोफिलस डीएनए पोलीमरेज़ I से प्राप्त होता है, जिसमें 5′→3′ डीएनए पोलीमरेज़ गतिविधि और मजबूत श्रृंखला प्रतिस्थापन गतिविधि होती है, लेकिन कोई 5′→3′ एक्सोन्यूक्लिज़ गतिविधि नहीं होती है।बीएसटी डीएनए पॉलीमरेज़ वी2 स्ट्रैंड-विस्थापन, इज़ोटेर्मल एम्प्लीफिकेशन लैंप (लूप मीडिएटेड इज़ोथर्मल एम्प्लीफिकेशन) और रैपिड सीक्वेंसिंग के लिए आदर्श रूप से उपयुक्त है।बीएसटी डीएनए पोलीमरेज़ वी2 प्रतिवर्ती संशोधन तकनीक द्वारा प्राप्त बीएसटी डीएनए पोलीमरेज़ वी2 (एचसी5005ए) पर आधारित एक हॉट-स्टार्ट संस्करण है, जो कमरे के तापमान पर डीएनए पोलीमरेज़ गतिविधि को रोक सकता है, इसलिए प्रतिक्रिया प्रणाली को गैर को रोकने के लिए कमरे के तापमान पर संचालित और तैयार किया जा सकता है। -विशिष्ट प्रवर्धन और प्रतिक्रिया दक्षता में सुधार, और इस संस्करण को लियोफिलाइज़ किया जा सकता है।इसके अलावा, इसकी गतिविधि उच्च तापमान पर जारी होती है, इसलिए अलग से सक्रियण चरण की कोई आवश्यकता नहीं होती है।
अवयव
| अवयव | एचसी5006A-01 | एचसी5006A-02 | एचसी5006A-03 |
बीएसटी डीएनए पोलीमरेज़ वी2 (ग्लिसरॉल-मुक्त)(8यू/μL) | 0.2 एमएल | 1 एमएल | 10 एमएल |
| 10×एचसी बीएसटी वी2 बफर | 1.5 एमएल | 2×1.5 एमएल | 3×10 एमएल |
| एमजीएसओ4(100एमएम) | 1.5 एमएल | 2×1.5 एमएल | 2×10 एमएल |
अनुप्रयोग
1.लैंप इज़ोटेर्मल प्रवर्धन
2.डीएनए स्ट्रैंड एकल विस्थापन प्रतिक्रिया
3.उच्च जीसी जीन अनुक्रमण
4.नैनोग्राम स्तर का डीएनए अनुक्रमण।
गोदाम की स्थिति
0°C के तहत परिवहन और -25°C~-15°C पर भंडारण किया जाए।
इकाई परिभाषा
एक इकाई को एंजाइम की मात्रा के रूप में परिभाषित किया गया है जो 65 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट में एसिड अघुलनशील सामग्री में 25 एनएमओएल डीएनटीपी को शामिल करता है।
गुणवत्ता नियंत्रण
1.प्रोटीन शुद्धता परख (एसडीएस-पेज):बीएसटी डीएनए पोलीमरेज़ वी2 की शुद्धता ≥99% है जो कोमासी ब्लू डिटेक्शन का उपयोग करके एसडीएस-पेज विश्लेषण द्वारा निर्धारित की जाती है।
2.Eएनडोन्यूक्लिज़गतिविधि:37 ℃ पर 16 घंटे के लिए 1 μg λDNA के साथ न्यूनतम 8 यू बीएसटी डीएनए पोलीमरेज़ वी2 युक्त 50 μL प्रतिक्रिया के ऊष्मायन के परिणामस्वरूप कोई पता लगाने योग्य गिरावट नहीं होती है, जैसा कि निर्धारित किया गया है।
3.एक्सोन्यूक्लिज़ गतिविधि:50 μL प्रतिक्रिया के ऊष्मायन में न्यूनतम 8 यू बीएसटी डीएनए पोलीमरेज़ वी2 के साथ 1 μg λ -हिन्द Ⅲ डाइजेस्ट डीएनए को 37 ℃ पर 16 घंटे तक रखने से कोई पता लगाने योग्य गिरावट नहीं होती है, जैसा कि निर्धारित किया गया है।
4.निकसे गतिविधि:37 डिग्री सेल्सियस पर 16 घंटे के लिए 1 μg पीबीआर322 डीएनए के साथ न्यूनतम 8 यू बीएसटी डीएनए पोलीमरेज़ वी2 युक्त 50 μL प्रतिक्रिया के ऊष्मायन के परिणामस्वरूप कोई पता लगाने योग्य गिरावट नहीं होती है, जैसा कि निर्धारित किया गया है।
5.RNase गतिविधि:50 μL प्रतिक्रिया के ऊष्मायन में न्यूनतम 8 यू बीएसटी डीएनए पोलीमरेज़ वी2 के साथ 1.6 μg एमएस2 आरएनए को 37 डिग्री सेल्सियस पर 16 घंटे तक रखने से कोई पता लगाने योग्य गिरावट नहीं होती है, जैसा कि निर्धारित किया गया है।
6.ई कोलाईडीएनए:ई. कोलाई 16एस आरआरएनए लोकस के लिए विशिष्ट प्राइमरों के साथ टैकमैन क्यूपीसीआर का उपयोग करके ई. कोलाई जीनोमिक डीएनए की उपस्थिति के लिए बीएसटी डीएनए पोलीमरेज़ वी2 के 120 यू की जांच की जाती है।ई. कोलाई जीनोमिक डीएनए संदूषण ≤1 कॉपी है।
लैंप प्रतिक्रिया
| अवयव | 25μL |
| 10×एचसी बीएसटी वी2 बफर | 2.5 μL |
| एमजीएसओ4 (100एमएम) | 1.5 μL |
| dNTPs (प्रत्येक 10mM) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 हरा (25×)a | 1.0 μL |
| प्राइमर मिश्रणb | 6 μL |
| बीएसटी डीएनए पोलीमरेज़ वी2 (ग्लिसरॉल-मुक्त) (8 यू/यूएल) | 1 μL |
| खाका | × μL |
| ddH₂O | 25 μL तक |
टिप्पणियाँ:
1)ए.SYTOTM 16 हरा (25×): प्रायोगिक आवश्यकताओं के अनुसार, अन्य रंगों को विकल्प के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है;
2) बी.प्राइमर मिश्रण: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB और अन्य मात्राओं को मिलाकर प्राप्त किया जाता है।
प्रतिक्रिया एवं स्थिति
1 × HC Bst V2 बफर, ऊष्मायन तापमान 60°C और 65°C के बीच है।
ताप निष्क्रियता
80°सेल्सियस, 20 मिनट
