DNase I
DNase I (डीऑक्सीराइबोन्यूक्लिज़ I) एक एंडोडॉक्सीराइबोन्यूक्लिज़ है जो एकल या डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए को पचा सकता है।यह 5′-टर्मिनल पर फॉस्फेट समूहों और 3′-टर्मिनल पर हाइड्रॉक्सिल के साथ मोनोडीऑक्सीन्यूक्लियोटाइड्स या सिंगल- या डबल-स्ट्रैंडेड ऑलिगोडॉक्सीन्यूक्लियोटाइड्स का उत्पादन करने के लिए फॉस्फोडाइस्टर बॉन्ड को पहचानता है और तोड़ता है।DNase I की गतिविधि Ca2+ पर निर्भर करती है और इसे Mn2+ और Zn2+ जैसे द्विसंयोजक धातु आयनों द्वारा सक्रिय किया जा सकता है।5mM Ca2+ एंजाइम को हाइड्रोलिसिस से बचाता है।Mg2+ की उपस्थिति में, एंजाइम बेतरतीब ढंग से डीएनए के किसी भी स्ट्रैंड पर किसी भी साइट को पहचान और तोड़ सकता है।एमएन2+ की उपस्थिति में, डीएनए के दोहरे स्ट्रैंड को एक साथ पहचाना जा सकता है और लगभग एक ही स्थान पर विभाजित करके फ्लैट सिरे वाले डीएनए टुकड़े या चिपचिपे सिरे वाले डीएनए टुकड़े बनाए जा सकते हैं, जिनमें 1-2 न्यूक्लियोटाइड उभरे हुए होते हैं।
उत्पाद संपत्ति
गोजातीय अग्न्याशय DNase I को खमीर अभिव्यक्ति प्रणाली में व्यक्त किया गया और शुद्ध किया गया।
Cप्रतिद्वंद्वी
| अवयव | आयतन | |||
| 0.1KU | 1केयू | 5केयू | 50KU | |
| DNase I, RNase-मुक्त | 20μL | 200μL | 1एमएल | 10 एमएल |
| 10×DNase I बफ़र | 1एमएल | 1एमएल | 5× 1एमएल | 5× 10mL |
परिवहन एवं भंडारण
1. भंडारण स्थिरता:-भंडारण के लिए 15℃~-25℃;
2.परिवहन स्थिरता: आइस पैक के तहत परिवहन;
3. आपूर्ति की गई: 10 एमएम ट्रिस-एचसीएल, 2 एमएम सीएसीएल2, 50% ग्लिसरॉल, पीएच 7.6 25℃ पर।
इकाई परिभाषा
एक इकाई को एंजाइम की मात्रा के रूप में परिभाषित किया गया है जो 37 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट में 1 माइक्रोग्राम पीबीआर322 डीएनए को पूरी तरह से नष्ट कर देगा।
गुणवत्ता नियंत्रण
आरएनएसई:37 ℃ पर 4 घंटे के लिए 1.6 μg MS2 RNA के साथ DNase I का 5U, एगरोज़ जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा निर्धारित अनुसार कोई गिरावट नहीं देता है।
जीवाणु एंडोटॉक्सिन:एलएएल-परीक्षण, चीनी फार्माकोपिया IV 2020 संस्करण के अनुसार, जेल सीमा परीक्षण विधि, सामान्य नियम (1143)।बैक्टीरियल एंडोटॉक्सिन सामग्री ≤10 ईयू/मिलीग्राम होनी चाहिए।
उपयोग के लिए निर्देश
1.नीचे सूचीबद्ध अनुपात के अनुसार RNase-मुक्त ट्यूब में प्रतिक्रिया समाधान तैयार करें:
| अवयव | आयतन |
| शाही सेना | एक्स μg |
| 10 × DNase I बफ़र | 1 μL |
| DNase I, RNase-मुक्त(5U/μL) | 1 यू प्रति μg आरएनए |
| डीडीएच2O | 10 μL तक |
15 मिनट के लिए 2.37 ℃;
3. प्रतिक्रिया को रोकने के लिए समाप्ति बफर जोड़ें, और DNase I को निष्क्रिय करने के लिए 10 मिनट के लिए 65 ℃ पर गर्म करें। नमूना का उपयोग सीधे अगले प्रतिलेखन प्रयोग के लिए किया जा सकता है।
टिप्पणियाँ
1.प्रति μg RNA के लिए 1U DNase I, या 1μg RNA से कम के लिए 1U DNase I का उपयोग करें।
2. एंजाइम निष्क्रियता के दौरान आरएनए को ख़राब होने से बचाने के लिए 5 एमएम की अंतिम सांद्रता में ईडीटीए जोड़ा जाना चाहिए।
