सीएचओ एचसीपी एलिसा किट
इस परख में वन-स्टेप इम्युनोसॉरबेंट एलिसा विधि का उपयोग किया जाता है।CHOK1 HCP वाले नमूने एक साथ HRP-लेबल वाले बकरी विरोधी CHOK1 एंटीबॉडी और एलिसा प्लेट पर लेपित एंटी-CHOK1 एंटीबॉडी के साथ प्रतिक्रिया करते हैं, अंततः ठोस-चरण एंटीबॉडी-एचसीपी-लेबल एंटीबॉडी का एक सैंडविच कॉम्प्लेक्स बनाते हैं।एलिसा प्लेट को धोकर अनबाउंड एंटीजन-एंटीबॉडी को हटाया जा सकता है।पर्याप्त प्रतिक्रिया के लिए टीएमबी सब्सट्रेट को कुएं में जोड़ा जाता है।स्टॉप सॉल्यूशन जोड़ने के बाद रंग विकास बंद हो जाता है, और 450/650nm पर प्रतिक्रिया सॉल्यूशन का OD या अवशोषण मान माइक्रोप्लेट रीडर के साथ पढ़ा जाता है।OD मान या अवशोषण मान समाधान में HCP सामग्री के समानुपाती होता है।इससे, मानक वक्र के अनुसार समाधान में एचसीपी एकाग्रता की गणना की जा सकती है।
आवेदन
इस किट का उपयोग नमूनों में CHOK1 होस्ट सेल प्रोटीन अवशेषों की सामग्री का मात्रात्मक पता लगाने के लिए किया जाता है।
Cप्रतिद्वंद्वी
| एस/एन | अवयव | एकाग्रता | जमा करने की अवस्था |
| 1 | CHOK1 एचसीपी मानक | 0.5एमजी/एमएल | ≤–20℃ |
| 2 | एंटी-सीएचओ एचसीपी-एचआरपी | 0.5एमजी/एमएल | ≤–20℃, प्रकाश से बचाएं |
| 3 | टीएमबी | NA | 2-8℃, प्रकाश से बचाएं |
| 4 | 20 × पीबीएसटी 0.05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | समाधान रोकें | NA | RT |
| 6 | माइक्रोप्लेट सीलर्स | NA | RT |
| 7 | बीएसए | NA | 2-8℃ |
| 8 | उच्च सोखना पूर्व-कोटिंग प्लेटें | NA | 2-8℃ |
उपकरणों की आवश्यकता
| उपभोग्य वस्तुएं/उपकरण | उत्पादन | सूची |
| माइक्रोप्लेट रीडर | आणविक उपकरण | स्पेक्ट्रा मैक्स M5, M5e, या समकक्ष |
| थर्मोमिक्सर | Eppendorf | एप्पेंडॉर्फ/5355, या समकक्ष |
| भंवर मिक्सर | आईकेए | MS3 डिजिटल, या समकक्ष |
भंडारण और स्थिरता
1.-25~-15°C पर परिवहन.
2.भंडारण की स्थितियाँ तालिका 1 में दर्शाई गई हैं;घटक 1-2 को ≤-20°C, 5-6 को RT,3, संग्रहित किया जाता है।4、7、8 को 2-8℃ पर संग्रहित किया जाता है;वैधता अवधि 12 महीने है.
उत्पाद पैरामीटर
1.संवेदनशीलता: 1एनजी/एमएल
2.डिटेक्शन रेंज: 3- 100ng/mL
3.परिशुद्धता: इंट्रा-परख सीवी≤ 10%, अंतर-परख सीवी≤ 15%
4.एचसीपी कवरेज: >80%
5.विशिष्टता: यह किट सार्वभौमिक है क्योंकि यह विशेष रूप से शुद्धिकरण प्रक्रिया से स्वतंत्र CHOK1 HCP के साथ प्रतिक्रिया करती है।
अभिकर्मक तैयारी
1.पीबीएसटी 0.05%
डीडीएच में पतला 20×पीबीएसटी 0.05% का 15 मिलीलीटर लें2ओ, और 300 मिलीलीटर तक बनाया गया।
2.1.0% बीएसए
बोतल से 1 ग्राम बीएसए लें और 100 मिलीलीटर पीबीएसटी 0.05% में पतला करें, पूरी तरह से घुलने तक अच्छी तरह मिलाएं, और 2-8 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।तैयार तनुकरण बफर 7 दिनों के लिए वैध है।आवश्यकतानुसार तैयारी करने की अनुशंसा की जाती है।
3.डिटेक्शन सॉल्यूशन 2μg/mL
0.5 मिलीग्राम/एमएल एंटी-सीएचओ एचसीपी-एचआरपी का 48μL लें और 2μg/mL डिटेक्शन सॉल्यूशन की अंतिम सांद्रता प्राप्त करने के लिए 1% बीएसए के 11,952μL में पतला करें।
4.QC और CHOK1 HCP मानकों की तैयारी
| नली नहीं। | मूल | एकाग्रता | आयतन | 1%बीएसए | कुल मात्रा | अंतिम |
| A | मानक | 0.5एमजी/एमएल | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
तालिका: क्यूसी और मानकों की तैयारी
परख प्रक्रिया
1.ऊपर "अभिकर्मक तैयारी" में बताए अनुसार अभिकर्मक तैयार करें।
2.प्रत्येक कुएं में 50μL मानक, नमूने और QCs (तालिका 3 देखें) लें, फिर 100μL डिटेक्शन सॉल्यूशन (2μg/mL) डालें;प्लेट को सीलर से ढक दें और एलिसा प्लेट को थर्मोमिक्सर पर रखें।2 घंटे के लिए 500rpm, 25±3℃ पर इनक्यूबेट करें।
3.सिंक में माइक्रोप्लेट को उलटा करें और कोटिंग समाधान को हटा दें।एलिसा प्लेट को धोने और घोल को त्यागने के लिए प्रत्येक कुएं में पीबीएसटी 0.05% का 300μL पिपेट करें, और धुलाई को 3 बार दोहराएं।प्लेट को साफ कागज़ के तौलिये पर पलटें और थपथपा कर सुखा लें।
4.प्रत्येक कुएं में 100μL ofTMB सब्सट्रेट (तालिका 1 देखें) जोड़ें, एलिसा प्लेट को सील करें, और 15 मिनट के लिए 25±3℃ पर अंधेरे में रखें।
5.प्रत्येक कुएं में 100μL स्टॉप सॉल्यूशन पिपेट करें।
6.माइक्रोप्लेट रीडर के साथ 450/650 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर अवशोषण को मापें।
7.SoftMax या समकक्ष सॉफ़्टवेयर द्वारा डेटा का विश्लेषण करें।चार-पैरामीटर लॉजिस्टिक रिग्रेशन मॉडल का उपयोग करके मानक वक्र प्लॉट करें।
मानक वक्र उदाहरण
नोट: यदि नमूने में एचसीपी की सांद्रता मानक वक्र की ऊपरी सीमा से अधिक है, तो परीक्षण से पहले इसे कमजोर पड़ने वाले बफर के साथ ठीक से पतला करने की आवश्यकता है।
टिप्पणियाँ
स्टॉप सॉल्यूशन 2M सल्फ्यूरिक एसिड है, छींटे से बचने के लिए कृपया सावधानी से संभालें!
